实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠胸腺萎缩机制探究

摘要

背景：
　　多发性硬化（multiplesclerosis,MS）是一种自身免疫性疾病，病理表现为中枢神经系统神经细胞脱髓鞘及轴突消失，临床多表现为肢体运动功能障碍，严重危害人体健康。中枢神经系统髓鞘抗原特异性CD4+T细胞是疾病发生的关键因素。实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE）是目前研究MS的一种最常见动物模型，中枢神经系统炎性细胞浸润，病理性脱髓鞘，轴突消失等病理特征与MS类似。研究表明，EAE小鼠发病高峰期出现脾脏，淋巴结，胸腺的严重萎缩及细胞减小。胸腺作为一种重要的中枢免疫器官，参与T淋巴细胞的阴性选择和阳性选择，对T淋巴细胞的发育及成熟起到至关重要的作用。前期研究发现EAE小鼠发病高峰期胸腺CD4+CD8+DP细胞几乎消失，胸腺体积严重萎缩。EAE小鼠胸腺萎缩的机制如何？其与疾病严重程度的关系如何？中枢与外周免疫器官如何协调参与EAE发病过程？
　　针对以上问题，本研究分两部分，第一部分研究EAE小鼠疾病严重程度与胸腺萎缩程度的关系，第二部分研究EAE诱导过程中胸腺、脾脏、淋巴结细胞的变化，进而探究EAE小鼠胸腺萎缩可能机制。
　　第一部分EAE小鼠胸腺萎缩与疾病严重程度关系的初步探究
　　目的：
　　研究EAE小鼠胸腺萎缩与疾病严重程度的关系。
　　方法：
　　MOG35-55肽免疫C57BL/6小鼠诱导EAE,分析EAE小鼠发病高峰期疾病严重程度与胸腺萎缩的关系，然后流式细胞术检测并分析胸腺CD4+CD8+双阳性细胞，CD4+CD8-，CD4-CD8+单阳性细胞与疾病严重程度的关系。
　　结果：
　　尾部无力小鼠胸腺淋巴细胞数为（20.25±3.49）×106个，双后肢无力小鼠胸腺淋巴细胞数为（4.93±0.85）×106个，双后肢瘫痪小鼠胸腺淋巴细胞数为（1.8±0.19）×106个，四肢完全瘫痪小鼠胸腺淋巴细胞数为（0.52±0.07）×106个，EAE小鼠发病高峰期胸腺淋巴细胞数与疾病严重程度呈负相关（r=-0.898）；EAE小鼠发病高峰期疾病越重，CD4+CD8+双阳性细胞在胸腺细胞中的比例越低（r=-0.921），CD4+CD8-单阳性细胞（r=-0.935）和CD4-CD8+单阳性细胞（r=-0.913）在胸腺细胞中比例越高。
　　结论：
　　EAE小鼠发病高峰期疾病严重程度与胸腺萎缩程度呈正相关，CD4+CD8+双阳性细胞比例与EAE小鼠发病高峰期疾病严重程度呈负相关，CD4+CD8-和CD4-CD8+单阳性细胞比例与EAE小鼠发病高峰期疾病严重程度呈正相关。活化T淋巴细胞的定向迁移可能导致EAE小鼠胸腺萎缩。
　　第二部分T细胞定向迁移诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠胸腺萎缩
　　目的：
　　初步探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠胸腺萎缩的机制。
　　方法：
　　髓鞘少突胶质糖蛋白（MOG）免疫C57BL/6小鼠诱导EAE，卵清蛋白（OVA）免疫的小鼠作为对照；不同时间点计数胸腺、脾脏、淋巴结细胞总数，检测脾脏中胸腺来源细胞及中枢神经系统浸润细胞。
　　结果：
　　MOG肽成功诱导EAE动物模型.MOG和OVA免疫均能诱导胸腺细胞增加，第5天达到高峰，随后逐渐下降；EAE发病后胸腺细胞迅速减少；MOG和OVA免疫后脾脏和淋巴结细胞总数持续升高，新近胸腺来源的T细胞增加尤其明显；EAE发病后脾脏T细胞总数减少，中枢神经系统浸润淋巴细胞总数增加。
　　结论：
　　大量T细胞在胸腺发育成熟并释放入外周，进而定向迁移至中枢神经系统诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎是胸腺萎缩的主要原因。

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中英文缩略词表

第一部分 EAE小鼠胸腺萎缩与疾病严重程度关系的初步探究

引言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学分析

结果

1 EAE小鼠模型的成功诱导

2 EAE小鼠发病高峰期胸腺淋巴细胞数与疾病严重程度的关系

3 EAE小鼠发病高峰期胸腺细胞各亚群与疾病严重程度的关系

4 EAE小鼠胸腺的可复性

讨论

结论

参考文献

第二部分 T细胞定向迁移诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠胸腺萎缩

引言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学分析

结果

1 诱导EAE小鼠模型

2 EAE发病过程中胸腺细胞变化

3 小鼠免疫后脾脏细胞变化

4 中枢神经系统单个核细胞检测

讨论

结论

参考文献

综述: Th17细胞在中枢神经系统自身免疫病中的作用

个人简历、在读期间发表的论文与研究成果

致谢