FOXP3、PD-1及PD-L1在宫颈癌组织中的表达及其相关性分析

摘要

背景与目的：
　　宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，近年来呈现年轻化的趋势。近年来关于肿瘤微环境(tumormicroenvironment)的研究越来越多，研究发现恶性肿瘤的发生、发展、转移及预后都与肿瘤细胞所处的周围环境因素有关，肿瘤细胞与其周围的环境之间有着复杂的联系。目前宫颈癌肿瘤微环境已经成为研究的热点及焦点。免疫监视是免疫系统最基本的功能之一。它可以识别、破坏、杀死或抑制突变细胞，防止肿瘤的发生。肿瘤浸润淋巴细胞（tumorinfiltratinglymphocyte，TIL）尤其CD8+T细胞数量减少和免疫无能在宫颈癌的发生发展中起关键性作用。TIL是存在于肿瘤间质内以T淋巴细胞为主的一种异质性淋巴细胞群体。程序性死亡配体-1(programmeddeathligand1，PD-L1)，又称B7-H1，是免疫反应中极其重要的协同刺激分子。程序性死亡受体-1(programmeddeath1，PD-1)属于CD28/CTLA-4受体亚家族，表达在活化的T细胞和B细胞上。近来文献报道，多种恶性肿瘤异常表达PD-L1，高表达的PD-L1与TIL上表达的PD-1相结合，抑制了周围淋巴细胞的活性，从而使肿瘤细胞逃避了免疫系统的监视与攻击。调节性T细胞(regulatoryTcell，Treg)是调节免疫抵制及免疫无能的一类细胞，在许多人类恶性肿瘤组织中有较高表达，其在宫颈癌的发生和发展中所起的作用逐渐受到了重视。叉头翼状螺旋转录因子(forkheadorwingedhelixtranscriptionfactor，FOXP3)目前被认为是Treg细胞最具特异性的标志。本研究应用免疫组化（SP）的方法检测FOXP3、PD-1、PD-L1在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织（CIN）、宫颈癌组织及淋巴结中的表达情况，通过分析分子之间及其与临床病理特征的相关性，探讨它们与宫颈癌发生发展的关系，为宫颈癌诊断及治疗提供更多的实验依据。
　　方法：
　　采用免疫组织化学SP法检测FOXP3、PD-1、PD-L1在64例宫颈癌组织、40例宫颈上皮内瘤样病变组织、18例正常宫颈组织、30例宫颈癌淋巴结中的表达情况。将淋巴结分为3组，LN(+)组：淋巴结转移患者的阳性转移淋巴结；LN(-)组：淋巴结转移患者的未转移淋巴结；LN′组：无淋巴结转移患者的淋巴结。分析FOXP3、PD-1、PD-L1在宫颈癌的发生、发展及转移中的作用，探讨其在宫颈癌诊断及治疗中的价值。
　　结果：
　　1．FOXP3在宫颈癌组中阳性率为85.9％，CIN组中的阳性率为82.5%，而在正常宫颈组中不表达，差异具有统计学意义（P＜0.05）。PD-1在宫颈癌组TIL中的阳性表达率为76.6%（49/64），显著高于CIN组（30%）及正常宫颈组（0%），差异均具有统计学意义（P＜0.05）。PD-L1在宫颈癌及CIN中的阳性表达率无明显差异，差异无统计学意义（P＞0.05），与正常宫颈比较有显著差异，差异具有统计学意义（P＜0.05）。其中，PD-L1在宫颈癌细胞的阳性表达率为75%(48/64)，在TIL的阳性表达率为56.25%（36/64）。
　　2．FOXP3在同一患者的LN(+)组和LN(-)组中的表达一致，阳性表达率为40%，在LN′组中不表达，差异具有统计学意义（P＜0.05）。PD-1、PD-L1在LN(+)组和LN(-)组中的阳性表达率均为100%，在LN′组中不表达，差异具有统计学意义（P＜0.05）。
　　3．FOXP3、PD-1及PD-L1的表达与宫颈癌患者的年龄、病灶大小及HPV感染或分型无关，差异无统计学意义(P＞0．05)，但与宫颈癌FIGO分期、组织学分级及淋巴结转移有关，差异具有统计学意义（P＜0.05）。组织分化程度低者(G3)FOXP3、PD-1及PD-L1阳性表达率高于中高分化者(G1-G2),差异具有统计学意义（P＜0.05）；FIGO分期III-IV期宫颈癌患者的FOXP3、PD-1及PD-L1的阳性表达率明显高于I-II其患者，差异具有统计学意义（P＜0.05）。PD-1和PD-L1在LN(+)组、LN(-)组表达均为阳性，FOXP3在LN(+)组、LN(-)组的阳性表达率为40%，在LN′组不表达，差异具有统计学意义（P＜0.05）。
　　4.宫颈癌细胞中PD-L1表达与PD-1表达呈显著正相关(r=0.915)，TIL中PD-L1与PD-1表达呈正相关(r=0.657)。TIL中FOXP3与PD-1之间表达无明显相关性，TIL及宫颈癌组织中FOXP3与PD-L1表达之间呈正相关（r=0.493）。
　　结论：
　　1．宫颈癌组织浸润淋巴细胞高表达FOXP3，且FOXP3与宫颈癌FIGO分期、组织学分级及淋巴结转移相关，提示FOXP3与肿瘤的发生、发展、浸润和转移密切相关。
　　2．宫颈癌组织浸润淋巴细胞高表达PD-1、PD-L1，PD-L1还可在宫颈癌细胞表达，PD-1、PD-L1与宫颈癌FIGO分期、组织学分级及淋巴结转移相关，说明PD-1、PD-L1与肿瘤的发生、发展、浸润和转移密切相关。
　　3.宫颈癌组织中PD-1与PD-L1的表达呈正相关，提示PD-1/PD-L1信号通路在宫颈癌的发生、发展中起着重要作用。

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缩略词表

前言

材料与方法

1 研究对象及一般资料

2 主要试剂

3 主要仪器

4 实验试剂的配置

5 实验方法

结果

1 FOXP3、PD-1、PD-L1在不同宫颈组织中的表达情况

2 FOXP3、PD-1、PD-L1在淋巴结中的表达情况

3 FOXP3、PD-1、PD-L1与宫颈癌临床病理特征的关系

4 宫颈癌组织中FOXP3、PD-1、PD-L1表达的相关性分析

附图

讨论

1 FOXP3的结构及生物学功能

2 PD-1、PD-L1的结构及生物学功能

3 FOXP3、PD-1、PD-L1在不同宫颈组织及淋巴结中的表达及与临床病理特征的关系

4 FOXP3、PD-1、PD-L1在宫颈癌中表达的相关性

结论

参考文献

综述: 肿瘤微环境与宫颈癌的关系

个人简历及在校期间发表的学术论文

致谢