苦参碱与红霉素联合在体外诱导k562细胞凋亡的初步研究

摘要

目的：本实验初步研究不同浓度的苦参碱和红霉素在体外诱导人白血病细胞株K562细胞凋亡的作用，以及对凋亡相关基因caspase-3蛋白的表达情况的检测，观察联合用药对白血病细胞增值与凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。 方法：本实验用苦参碱和红霉素作用于人白血病k562细胞，采用噻唑蓝(MTT)比色法，苏木精-伊红(HE)染色法，末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法，免疫组化法检测caspase-3蛋白的表达等方法，观察k562细胞经一定浓度苦参碱和红霉素单独、联合作用不同时间后细胞增殖与凋亡的变化，以研究他们诱导k562细胞凋亡的作用及其与caspase-3表达的关系，为治疗白血病提供理论与实验依据。 结果：1.细胞生长抑制实验结果显示：不同浓度的苦参碱和红霉素作用后均可抑制k562细胞的生长，且生长抑制作用随着作用浓度的增加而明显增加，药物处理24h后，Mat50ug/ml+EM100ug/ml、Mat50ug/ml+EM200ug/ml、Mat50+EM400ug/ml的抑制率分别为(13.58±3.31)﹪，(39.38±5.11)﹪，(48.96±8.26)﹪，Mat250ug/ml+EM100ug/ml、Mat250ug/ml+EM200ug/ml、Mat250ug/ml+EM400ug/ml的抑制率分别为(35.66±13.79)﹪，(47.96±7.86)﹪，(53.52±4.60)﹪，Mat1250ug/ml+EM100ug/ml、Mat1250ug/ml+EM200ug/ml、Mat1250ug/ml+EM400ug/ml的抑制率分别为(44.93±6.46)﹪，(52.99±2.28)﹪，(69.45±3.24)﹪。采用析因设计资料的方差分析，结果表明不同浓度的苦参碱差别有统计学意义(F=44.29，P＜0.0001)，不同浓度的红霉素差别有统计学意义(F=63.11，P＜0.0001)，二者的交互作用有统计学意义(F=4.01，P=0.0072)。 2.苏木精—伊红染色观察细胞凋亡结果显示：不同浓度的苦参碱与红霉素作用于k562细胞不同时间后，可观察到细胞凋亡特征性形态学改变。与阴性对照组相比较，各药物组早期可见细胞体积的缩小，细胞膜皱缩，胞浆减少，染色质凝集；中期可见胞浆内出现空泡，并出现发芽、起泡现象，细胞膜不规则，染色质碎裂，被核膜分割成块状，凋亡小体形成；晚期可见降解的凋亡小体碎片，具有浓度和时间依赖性。 3.缺口末端标记法测定：苦参碱与红霉素各浓度组不同作用时间段的细胞均有明显的凋亡率，且凋亡率与作用时间和药物浓度成正比。以浓度为Mat50ug/ml+EM100ug/ml、Mat50ug/ml+EM200ug/ml、Mat50ug/ml+EM400ug/ml处理24h后，细胞的凋亡率分别为(18.20±1.61)﹪，(28.00±2.00)﹪，(41.70±1.88)﹪，48h后的细胞凋亡率分别为(38.70±2.16)﹪，(49.40±1.57)﹪，(65.30±1.49)﹪，72h后的细胞凋亡率分别为(59.80±1.47)﹪，(72.90±1.19)﹪，(86.70±1.82)﹪，浓度为Mat250ug/ml+EM100ug/ml、Mat250ug/ml+EM200ug/ml、Mat250ug/ml+EM400ug/ml处理24h后，细胞的凋亡率分别为(23.90±2.42)﹪，(36.40±1.64)﹪，(49.50±1.71)﹪，48h后的细胞凋亡率分别为(50.50±1.90)﹪，(63.70±1.70)﹪，(78.20±1.93)﹪，72h后的细胞凋亡率分别为(83.10±2.23)﹪，(92.50±2.01)﹪，(96.30±1.56)﹪，浓度为Mat1250ug/ml+EM100ug/ml、Mat1250ug/ml+EM200ug/ml、Mat1250ug/ml+EM400ug/ml处理24h后，细胞的凋亡率分别为(34.40±1.83)﹪，(51.20±1.87)﹪，(48.10±1.52)﹪，48h后的细胞凋亡率分别为(67.00±2.58)﹪，(82.80±1.87)﹪，(79.40±2.06)﹪，72h后的细胞凋亡率分别为(88.90±2.13)﹪，(94.30±2.31)﹪，(87.60±2.54)﹪，其中较高浓度的苦参碱250ug/ml、红霉素400ug/ml的两种药物联合作用72h的凋亡率最高。 4.药物诱导后的白血病细胞的免疫细胞化学结果：经苦参碱和红霉素处理后的k562细胞株与对照组比较，caspase-3蛋白表达明显升高(P＜0.01)。 结论：1.苦参碱在一定浓度范围内，可抑制体外培养的人白血病k562的增殖，并诱导凋亡，这种作用呈时间与剂量依赖性。 2.红霉素在一定浓度范围内，可抑制体外培养的人白血病k562的增殖，并诱导凋亡，这种作用亦呈时间与剂量依赖性。 3.苦参碱与红霉素具有协同诱导k562细胞凋亡，抑制增殖的作用。但超过一定的浓度其诱导凋亡的作用则有所下降。关于这方面的研究有待进一步探讨。 4.随着苦参碱、红霉素浓度和时间的增加，k562细胞中caspase-3的表达逐渐升高；其诱导k562细胞凋亡的机制可能与caspase-3的表达有关。

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文献综述

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

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