龙血竭抑制脂多糖诱导小胶质细胞活化的作用研究

摘要

小胶质细胞（Microglia）异常活化所介导的神经炎症与多种中枢神经系统疾病有关。小胶质细胞异常活化释放白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）等多种炎症因子。上述炎症因子的持续大量释放，会直接损伤神经元，或进一步激活小胶质细胞形成恶性循环，最终导致神经元逐渐退行性改变或死亡而发生阿尔茨海默病（AD）、帕金森病（PD）等神经退行性疾病。因此，对小胶质细胞异常活化进行有效的抑制已成为抗AD、PD药物研究的极具潜力的靶标。
　　本课题研究组前期研究首次发现，传统中药龙血竭（LXJ）具有显著的小胶质细胞活化的抑制作用，且在发挥作用的浓度下未表现出明显毒性。以活性为导向从活性部位中分离鉴定了20个单体化合物，初步的活性评价结果显示：8号单体化合物(LXJ-8)的活性较强、且含量较高。本文在此基础上，采用脂多糖（LPS）所诱导小胶质细胞活化的模型，综合运用Real time PCR、Western-blot、ELISA、免疫荧光等实验技术，系统研究LXJ-8抑制小胶质细胞异常活化的作用及其可能机制。
　　Griess实验结果表明，LXJ-8（10，100μM）能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞NO的释放，ELISA实验结果表明，LXJ-8（1，10，100μM）能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞IL-1β的释放，LXJ-8（10，100μM）能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞IL-6的释放。Real time PCR实验结果表明，LXJ-8（1，10，100μM）能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）mRNA的表达，LXJ-8（10，100μM）能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞IL-1βmRNA的表达，LXJ-8（1，10，100μM）能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞IL-6 mRNA的表达。Western-blot实验结果表明，LXJ-8(100μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞TLR4蛋白的表达。进而针对丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）家族及Akt通路进行了研究，结果表明，LXJ-8（1，10，100μM）能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞p-JNK、p-p38的蛋白表达，对p-ERK的表达无明显作用。LXJ-8（1，10μM）能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞细胞核内c-Jun蛋白的表达。LXJ-8（1，10，100μM）对LPS所致N9小胶质细胞p-Akt蛋白的表达无明显影响。Western-blot实验结果表明，LXJ-8（1，10，100μM）能够显著抑制LPS所致 N9小胶质细胞 p-I?B?蛋白的表达，并显著逆转 I?B?蛋白的降解；免疫荧光实验结果表明，LXJ-8（100μM）能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞所致的NF-κB p65蛋白的核转位。上述结果提示，LXJ-8对LPS所致N9小胶质细胞活化的抑制作用可能与其对NF-?B、MAPKs信号通路的抑制作用有关。
　　综上所述，本研究首次发现，LXJ-8能够显著抑制 LPS所致小胶质细胞 NO、IL-6、IL-1β的释放及 iNOS、IL-6、IL-1β mRNA的表达，其作用机制可能是通过抑制TLR4介导的NF-κB、JNK-MAPK信号通路而实现的。

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前言

第一章 文献综述

1.1小胶质细胞简介

1.2小胶质细胞与神经炎症

1.3小胶质细胞与中枢神经系统疾病

1.4小胶质细胞与TLR4

1.5小胶质细胞活化相关的信号通路

1.6龙血竭（LXJ）

1.7立题依据

第二章 LXJ-8对LPS诱导小胶质细胞活化的抑制作用

2.1仪器与材料

2.2 实验方法

2.3 实验结果与讨论

2.4 小结

第三章 LXJ-8对TLR4介导的NF-?B, MAPKs及Akt信号通路的影响

3.1 仪器与材料

3.2 实验方法

3.3 实验结果与讨论

3.4小结

参考文献

致谢

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