乳铁蛋白修饰尼莫地平长循环纳米结构脂质载体的制备及其脑靶向性评价

摘要

目的:乳铁蛋白(Lf)用以修饰尼莫地平长循环纳米结构脂质载体(Lf-PEG-NMD-NLC)，对其理化性质进行考察，并对 Lf-PEG-NMD-NLC进行体外和体内的评价。
　　方法:选择熔融-超声法制备NLC并筛选最佳处方。在EDCI/NHS的催化下将NLC连接Lf，对Lf-PEG-NMD-NLC的形态、粒径、Zeta电位、包封率、载药量和体外释放进行考察，以外观、色泽、再分散性等为指标，优选了 Lf-PEG-NMD-NLC的冻干工艺和冻干保护剂。采用透射电镜(TEM)、马尔文动态光散射粒径仪对纳米粒的形态、粒径大小及zeta电位进行表征；采用透析法考察体外释放。紫外分光光度法(UV-vis)，红外法(FTIR)和核磁共振氢谱(1H NMR)鉴定 Lf-PEG-NLC的合成。硝普钠(SNP)诱导PC12细胞建立脑卒中(stroke)细胞模型，采用MTT法确定SNP抑制 PC12细胞生长的半数抑制浓度，荧光显微镜下观察不同时间下 PC12细胞对mPEG-NMD-NLC、Lf-PEG-NMD-NLC的摄取效果，采用流式计数法定量分析Lf-PEG-NMD-NLC对硝普钠诱导PC12细胞的保护作用。以DiR染料作为荧光探针用荷瘤小鼠体内活体成像技术测定纳米粒在24h后小鼠的脑内及离体组织器官荧光强度。
　　结果:所制得的 Lf-PEG-NMD-NLC粒径为(169.5±14.15)nm， Zeta电位为(-15.9±0.09)mV，包封率和载药量分别为(93.77±0.31)％和(1.43±0.02)%、Lf结合率为26.05±0.99%。选择300.00μmol·L-1作为硝普钠损伤 PC12细胞的有效浓度。Lf-PEG-NMD-NLC组在摄取4 h后荧光强度最为明显，经Lf-PEG-NMD-NLC保护后，与对照组和实验组相比，PC12细胞凋亡率为19.57±1.15%。活体成像表明，Lf-PEG-DiR-NLC在脑部的荧光强度是DiR溶液和mPEG-DiR-NLC的2.95和1.27倍，脑靶向性最强，表明所制备制剂具有显著的脑靶向效果。
　　结论:通过熔融-超声法，Box-Behnken效应面法优化处方制备符合药典要求，具有一定缓释性能。Lf-PEG-NMD-NLC的粒径、电位均呈单峰分布，包封率、载药量较高，稳定性较好。体外细胞实验表明 Lf-PEG-NMD-NLC对 PC12细胞的保护作用明显高NMD-NLC组和mPEG-NMD-NLC组。体内试验表明Lf-PEG-NMD-NLC不仅可以延长药物在体内的循环时间，并具有显著的长循环效果和脑靶向性。Lf-PEG-NMD-NLC生物利用度高，作用时间长，具有广阔的应用前景。

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前言

第1章 文献综述

1.1脑卒中概述

1.2尼莫地平的简介

1.3 乳铁蛋白的简介

1.4血脑屏障的生理学基础

1.5脑靶向制剂研究现状

1.6纳米结构脂质载体的简介

第2章 乳铁蛋白修饰尼莫地平长循环纳米结构脂质载体处方前研究

2.1 仪器与材料

2.2 方法

2.3 结果与讨论

2.4 小结

第3章 尼莫地平长循环纳米结构脂质载体的制备

3.1 仪器与材料

3.2 方法

3.3 结果与讨论

3.4 小结

第4章 乳铁蛋白修饰尼莫地平长循环纳米结构脂质载体的制备

4.1 仪器与材料

4.2 方法

4.3 结果与讨论

4.4 小结

第5章 Lf-PEG-NMD-NLC的理化性质及冻干工艺考察

5.1 仪器与材料

5.2 方法

5.3 结果与讨论

5.4 小结

第6章 Lf-PEG-NMD-NLC对硝普钠诱导的PC12细胞损伤的保护作用

6.1 仪器与材料

6.2 方法

6.3 结果与讨论

6.4 小结

第7章 Lf-PEG-NMD-NLC的小鼠体内活体成像研究

7.1 仪器与材料

7.2 方法

7.3 结果与讨论

7.4 小结

结论

参考文献

致谢

英文缩写

攻读学位期间发表的学术论文