Let-7b在结核性脑膜炎脑脊液外泌体中表达水平的研究

摘要

目的:
　　结核病目前仍然是一个全球性的公众健康问题，而这其中最致命和致残的结核病形式是结核性脑膜炎(tuberculous meningitis TBM)，保守估计每年超过约100，000例新发病例。结核性脑膜炎是一种由结核分支杆菌通过血液传播扩散引起的非化脓性脑脊膜的炎性疾病。然而，近年来由于结核杆菌的基因突变、抗结核杆菌药物的研发迟滞、耐药性结核杆菌的出现等，相关报道显示国内外结核性脑膜炎的发病率和死亡率并未明显降低。由于结核性脑膜炎的误诊及延迟治疗十分严重，早期确诊具有重要的临床意义。
　　病毒性脑膜炎是神经内科常见的颅内感染性疾病，由一种或多种病毒感染引起的脑膜急性或亚急性炎性疾病。主要表现为发烧、头痛、呕吐、抽搐、意识障碍等症状。随着细菌性脑膜炎的发病率的下降，病毒性脑膜炎成为临床最常见的无菌性脑膜炎。临床上柯萨奇病毒、脊髓灰质炎病毒、埃可病毒等肠道病毒感染多见，除此之外还有腺病毒、巨细胞病毒、疱疹病毒等其他病毒感染，随诊分子诊断学的临床应用，大大提高了病毒性脑膜炎的病原体的检测速度。
　　外泌体是一种可由多种细胞分泌到胞外的纳米级囊泡体，广泛存在于患者血液、脑脊液、尿液以及胸腔积液等不同体液中，含有丰富的蛋白质、脂质、核酸等物质，作为一种新型的细胞物质交换、信息传递载体，不仅参与中枢神经系统正常的生理过程，同时也参与中枢神经系统疾病的发生发展、损伤修复等过程。微小RNA(miRNA)是细胞内大小约21到25个核苷酸构成的非编码RNA，由内源基因编码，具有高度保守性，主要与靶基因mRNA相结合，是主要的基因表达调控分子之一。Let-7家族是第一个已知的人类miRNA，通过干预细胞的分裂、增殖以及分化、凋亡等过程，进而对靶基因的表达进行调控。而let-7b作为let-7家族中的成员之一，其在神经系统中的非正常表达与神经系统多种疾病密切相关。本研究通过分离提取结核性脑膜炎、病毒性脑膜炎及正常对照者脑脊液外泌体中let-7b，来观察let-7b的表达水平，探寻脑膜炎新的生物学诊断标志物。
　　方法:
　　收集本院神经科2017-2018年期间住院的15例结核性脑膜炎患者、15例病毒性脑膜炎患者、15例正常脑脊液患者，将其分组为结脑组、病脑组、对照组，收集5mL脑脊液标本。采取ExoQuick Precipitation提取剂分离提纯外泌体，采用透射电子显微镜观察不同组外泌体形态，应用qRT-PCR法检测各组脑脊液外泌体中let-7b相对表达水平。
　　结果:
　　1.结核性脑膜炎和病毒性脑膜炎及对照组脑脊液中均可以检测到外泌体，透射电镜下呈圆形或椭圆形，直径约30～100nm。荧光定量PCR检测发现3组脑脊液外泌体中均可检测到let-7b。
　　2.结脑组脑脊液外泌体中let-7b的表达显著低于对照组，差异具有明显统计学意义(P＜0.05)。
　　3.病脑组与对照组相比，病脑组let-7b表达下调，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　4.结脑组与病脑组相比，结脑组let-7b表达下调，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论:
　　结核性脑膜炎、病毒性脑膜炎及正常对照组中均可提纯到外泌体。let-7b在结核性脑膜炎患者脑脊液外泌体中表达下调，可作为该疾病的诊断及相关脑炎的鉴别诊断的潜在生物学标志物，但其具体的调控作用机制、结核性脑膜炎疾病治疗前后的变化仍需进一步的探索研究。

目录

声明

摘要

中英文缩略表

1 前言

2 材料与方法

2．1 材料

2．2 实验方法

2．3 统计学分析

3 实验结果

3．1 外泌体的形态学特征

3．2 CD9、CD63在脑脊液外泌体中的表达

3．3 脑脊液外泌体let-7家族的表达

3．4 脑脊液外泌体中let-7b的实时荧光定量PCR结果

3．5 不同外泌体中let-7b的实时荧光定量PCR结果

4 讨论

5 结论

参考文献

综述 外泌体在中枢神经系统疾病中的研究进展

个人简历

致谢