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酵母微囊负载靶向巨噬细胞PD--L1 shRNA抗肿瘤活性研究

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第一章前言

1.1 PD-1/PD-L1

1.2巨噬细胞

1.3酵母微囊

1.4结肠癌

第二章巨噬细胞极化中PD-L1的表达

2.1 引言

2.2实验材料与仪器

2.2.1实验材料

2.2.2实验仪器

2.2.3 实验试剂

2.2.4 实验溶剂

2.3实验方法

2.3.1 细胞培养

2.3.2 PEMs分离培养

2.3.3巨噬细胞极化

2.3.4 ELISA

2.3.5 qPCR

2.3.6 Western Blot

2.3.7转染

2.3.8 AOM/DSS法构建小鼠结肠癌模型

2.3.10结肠长度检测

2.3.11 HE染色

2.4实验结果

2.4.1 巨噬细胞极化

2.4.2不同极型巨噬细胞PD-L1表达量差异

2.4.3 shPD-L1对巨噬细胞极化的影响

2.4.4 DAI

2.4.5结肠长度检测

2.4.6结肠组织病理切片

2.4.7结肠癌模型诱导过程中PEMs PD-L1表达量的变化

2.4.8结肠癌模型诱导过程小鼠血清IL-10、IL-12的变化

2.5结论

第三章基于酵母微囊口服基因递送系统的构建及性能表征

3.1 引言

3.2实验材料与仪器

3.2.1实验材料

3.2.2实验仪器

3.2.3 实验试剂

3.2.4实验溶剂

3.3.1 YGM制备

3.3.2透射电子显微镜(TEM)

3.3.3纳米激光粒度仪检测粒径和电位

3.3.6 YGM/PEI-shRNA给药系统的制备

3.3.7 FITC标记PEI

3.3.11 YGM/PEI-shRNA给药系统胃肠道稳定性考察

3.3.12细胞增殖率

3.3.13细胞周期

3.3.14细胞凋亡

3.3.15 RBITC标记YGM

3.3.16细胞吞噬

3.3.17胞内分布

3.3.18细胞转染

3.3.19 巨噬细胞吞噬YGM机制考察

3.3.20 YGM体内转运吸收途径考察

3.3.21 YGM肠道吸收时间考察

3.3.22体内分布

3.4实验结果

3.4.1 透射电子显微镜(TEM)

3.4.2纳米激光粒度仪检测粒径、电位

3.4.3琼脂糖凝胶电泳实验

3.4.4 YGM对不同N/P比PEI-shRNA复合物负载情况考察

3.4.5反应时间对包封率的影响

3.4.6不同pH值对YGM/PEI-shRNA复合物稳定性的影响

3.4.7体外模拟胃肠道稳定性考察

3.4.8细胞增殖率

3.4.9细胞周期

3.4.10细胞凋亡

3.4.11细胞吞噬

3.4.12胞内分布

3.4.13 细胞转染

3.4.14巨噬细胞吞噬YGM机制考察

3.4.15 YGM体内吸收途径考察

3.4.16 YGM肠道吸收时间考察

3.4.17体内分布

3.5总结

第四章YGM/PEI-shPD-L1抗肿瘤作用考察

4.1 引言

4.2实验材料与仪器

4.2.1实验材料

4.2.2实验仪器

4.2.3 实验试剂

4.2.4 实验溶剂

4.3实验方法

4.3.1模拟肿瘤微环境对巨噬细胞极化的影响

4.3.2划痕修复实验

4.3.3 Transwell迁移实验

4.3.4 YGM/PEI-shPD-L1抗结肠癌作用考察

4.4实验结果

4.4.1 PD-L1在模拟肿瘤微环境中对巨噬细胞M2型极化的影响

4.4.2划痕修复实验

4.4.3 Transwell实验

4.4.4 YGM/PEI-shPD-L1体内抗结肠癌作用考察

4.5总结

第五章全文总结

参考文献

个人简历

致谢

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