完全去神经对大鼠再生肝雌激素受体表达的影响研究

摘要

目的:研究完全去神经对大鼠再生肝中雌激素受体表达的影响，进一步探讨神经对肝再生的调控机制。
　　 方法:将84只雄性SD大鼠随机分为2组(n=42):部分肝切除(PH)组、完全去神经(PHT)组。两组大鼠分别在术后12h、24h、36h、48h、72h、120h、168h处死取大鼠肝脏;用免疫组织化学法检测大鼠再生肝组织中雌激素两个受体(ERα、ERβ)和细胞色素P450的表达;用实时荧光定量法(RT-PCR)检测大鼠再生肝细胞中ERαmRNA、ERpmRNA和细胞色素P450mRNA的表达。
　　 结果:(1)本实验成功构建大鼠2/3肝切除模型和完全去神经再生肝模型。(2)大鼠再生肝中ERa的表达:与PH组比较，PHT组大鼠在术后12h～168h的ERα表达量逐渐增多，在术后36h～120h表达与PH组趋势相同逐渐增多并保持稳定，但显著高于肝切除组（P＜0.05），在术后168h的PHT组大鼠再生肝中ERα表达量达到峰值;(3)大鼠再生肝中ERβ表达:与PH组比，PHT组大鼠在术后12h～36h表达量逐渐增多，术后48h～120h表达能力逐渐减弱，数量逐渐减少为弱阳性表达，在术后168h又增多，在术后24h、36h、120h、168h有显著性差异(P＜0.05)，术后36h的ERp表达量达到峰值。(4)大鼠再生肝中细胞色素P450表达:与PH组比，两组大鼠的表达量变化规律较为一致，PHT组大鼠在术后36h～120h表达量逐渐减少且在术后24h、48h、72h、120h表达有显著性差异(P＜0.05)，术后36h、168h表达量较高，168h达到峰值。(5)大鼠再生肝细胞中ERαmRNA表达:与PH组比，PHT组大鼠从术后12h至24h肝细胞内ERαmRNA表达量上升并达到峰值，术后48h～120h表达量显著性降低(P＜0.05)，术后24h和48h表达能力最强。(6)大鼠再生肝细胞中ERβmRNA表达结果:与PH组比，PHT组大鼠再生肝细胞在术后12h～72h大鼠体内ERβmRNA表达量明显减少(P＜0.05)，在120h表达量显著性增多(P＜0.05)。(7)大鼠再生肝细胞中细胞色素P450mRNA表达结果:与PH组相比，PHT组大鼠在术后在术后12h～72h表达量显著性增强(P＜0.05)，120h再生肝细胞中P450mRNA表达量降低，在168h表达有显著性差异(P＜0.05)。
　　 结论:(1)完全去神经在术后48h～120h对大鼠残肝再生有促进作用(2)完全去神经对大鼠残肝再生的调控机制可能通过促进再生肝细胞雌激素受体α的表达，抑制雌激素受体β的表达来调节大鼠肝细胞的增殖过程，并且可能通过再生肝细胞CYP450表达活性的升高来调节体内物质代谢，促进肝脏再生。

目录

摘要

缩略语表

第一章 文献综述

1．1 肝脏的结构与神经分布

1．1．1 肝脏及其功能

1．1．2 肝脏的神经分布

1．2 神经对肝脏的调节

1．2．1 迷走神经的调节作用

1．2．2 交感神经的调节作用

1．3 肝脏再生机理

1．3．1 肝脏损伤程度与肝再生的关系

1．3．2 肝再生能力与肝再生的关系

1．3．3 营养支持与肝脏再生的关系

1．3．4 肝脏再生不同阶段正负调控因子的调节

1．4 大鼠肝再生研究现状

1．4．1 MMP-2与肝再生的关系

1．4．2 血管内皮生长因子与肝再生的关系

1．4．3 雌激素受体与肝再生的关系

1．4．4 细胞色素P450与肝再生的关系

1．5 研究的目的和意义

第二章 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要试剂配制

2．1．4 主要手术器械

2．1．5 主要仪器

2．2 动物模型制备的制备

2．2．1 术前准备

2．2．2 大鼠2／3肝切除组和对照组模型的建立

2．2．3 大鼠肝脏完全去神经再生肝模型的建立

2．2．4 术后管理

2．3 免疫组化法检测雌激素受体ERα、ERβ、CYP450的表达

2．3．1 动物分组、取材

2．3．2 石蜡包埋、制片

2．3．4 二步法免疫组化检测ERα的表达

2．3．5 二步法免疫组化检测ERβ的表达

2．3．6 二步法免疫组化检测细胞色素P450的表达

2．4 实时定量法(RT-PCR)检测大鼠肝脏细胞雌激素受体ERα mRNA、ERβ mRNA、CYP450 mRNA表达

2．4．1 动物分组与取材

2．4．2 总RNA提取与纯化

2．4．3 cDNA合成与纯化

2．4．4 Real-time PCR引物设计

2．4．5 实时荧光定量PCR反应

2．5 统计学处理

第三章 结果

3．1 动物模型的建立及成功关键因素

3．2 免疫组织化学法检测大鼠再生肝中ERα、ERβ、CYP450的表达

3．2．1 肝切除和完全去神经再生肝中ERα的表达

3．2．2 肝切除和完全去神经再生肝中ERβ的表达

3．2．3 肝切除和完全去神经再生肝中CYP450的表达

3．3 RT-PCR法检测再生肝中ERα mRNA、ERβ mRNA及CYP450 mRNA的表达

3．3．1 总RNA浓度测定和质量鉴定

3．3．2 RT-PCR反应结果

3．3．3 完全去神经对再生肝细胞中ERα表达的影响

3．3．4 完全去神经对再生肝细胞中ERβ表达的影响

3．3．5 完全去神经对再生肝细胞中CYP450表达的影响

第四章 讨论

4．1 大鼠肝脏完全去神经模型构建方法的选择

4．2 完全去神经对大鼠再生肝中ERα表达的影响

4．3 完全去神经对大鼠再生肝中ERβ表达的影响

4．4 完全去神经对大鼠再生肝中CYP450表达的影响

第五章 结论

参考文献

附录

致谢

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