灰枣离体叶片高效再生体系建立的研究

摘要

枣（ZizyphusjujubaMill.）为鼠李科枣属植物，是我国第一大干果树种和最具代表性的民族果树之一。灰枣耐干旱、瘠薄和盐碱，抗干热风，结果早，是优良的鲜食和制干兼用型品种，但其也存在病虫害严重，落花落果严重等缺陷。离体叶片再生技术是果树细胞水平的诱变育种、变异筛选、嵌合体分离及基因转移等方面的基础，目前已有民勤小枣、沾化冬枣、骏枣、毛叶枣等十几个品种的枣叶片再生体系建立成功，但未见有关灰枣离体叶片再生体系建立的报道。 本论文以灰枣为试材，分别通过愈伤组织分化不定芽、直接再生不定芽、不定根分化不定芽三种途径，研究各种因素如外植体条件、基本培养基类型、激素种类和浓度、光照条件、添加物等对灰枣不定芽再生过程的影响，优化各种条件，以期建立一个适合灰枣的高效、稳定再生体系。主要实验结论如下： （1）灰枣叶片愈伤组织的诱导宜选择组培苗叶片为外植体；苗茎中部叶片的愈伤组织诱导率高于茎顶部和下部的叶片愈伤组织诱导率，以第3-5片深绿色，平展，大而厚的叶片为佳；接种前不伤叶缘、垂直于主脉横切3-5刀，与纵切和不切相比，愈伤组织诱导率可提高到65.44％；接种方向对叶片愈伤组织的诱导影响不显著；暗培养可加速愈伤组织发生进程，适宜的暗培养时间为14d。叶片愈伤组织诱导的最适培养基为1/2MS附加6-BA0.5mg/L，2，4-D2.0mg/L，AgNO30.5mg/L，愈伤组织诱导率可达到96.67％。由叶片诱导的愈伤组织，只有黄绿色，致密的愈伤组织在分化培养基上培养3代（5周转接一次，为一代）后才可分化出芽，将其切成0.5c㎡大小接种于分化培养基，在MS附加6-BA3.0mg/L和IBA0.2mg/L培养基上分化率为13.77％，且一个愈伤组织块上只能分化出一个芽；在MS附加ZT2.0mg/L和IBA0.1mg/L培养基上能分化出丛生芽，分化率可达37.34％。 （2）叶片直接再生不定芽的最适培养基为WPM+NAA0.2mg/L+TDZ0.5mg/L；最佳外植体为灰枣组培苗中部平展，大而厚叶片；不定芽多在近叶柄处发生，再生率比近叶尖处高59.74％；以近轴面接触培养基接种较以远轴面接触培养基接种的再生率高16.81％；提高蔗糖浓度到40g/L可降低再生芽的玻璃化程度；适当时间的暗培养可以提高灰枣叶片再生能力，以10d的暗培养处理最佳；添加AgNO30.5mg/L叶片再生率可提高到82.25％，平均每叶片再生芽数为2.64个。 （3）灰枣组培苗叶片不定根诱导的最佳培养基为1/2MS附加NAA0.3mg/L和IBA2.0mg/L，诱导率为92.95％，诱导的不定根乳白色，粗壮。将不定根切成0.5cm的小段接种于WPM附加TDZ1.0mg/L和NAA0.2mg/L的分化培养基上，分化率可达44.51％，平均每不定根再生芽数2.08个。 （4）将分别通过愈伤组织再生、直接再生和不定根再生三种途径诱导的不定芽接种到继代增殖培养基MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+KT0.5mg/L，培养至35d，增殖系数为3.06。 （5）将继代增殖的再生苗切成2cm左右的茎段接种在生根壮苗培养基上诱导生根，最佳的生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L，培养40d的生根率达95.56％，再生苗基部仅有极少量的愈伤组织产生，发生的根粗壮，质量较好。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

致谢

第一章文献综述

1 枣资源概况

1.1 枣的起源

1.2 枣的分布及栽培现状

1.3 枣的常规繁殖方式

2 枣树组织培养研究进展

2.1 无菌短枝扦插途径

2.2 器官发生途径

2.3 体细胞胚发生途径

3 枣树组织培养技术的应用

3.1 多倍体育种

3.2 人工种子

3.3 遗传转化研究

4 影响枣树组织培养的有关因素及研究进展

4.1 外植本

4.2 培养基成分

4.3 培养条件

4.4 褐变和玻璃化现象

4.5 试管苗移栽

5 枣离体叶片雨生植株研究进展及其影响因素

5.1 基因型

5.2 培养基的成分

5.3 叶片对再生效果的影响

5.4 培养条件

5.5 玻璃化和褐化的影响

第二章引言

第三章愈伤组织分化不定芽

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 试验设计与方法

2 结果与分析

2.1 叶片来源对愈伤组织诱导的影响

2.2 不同部位叶片对愈伤组织诱导的影响

2.3 叶片不同部位对愈伤组织诱导的影响

2.4 叶片切割方式对愈伤组织诱导的影响

2.5 叶片接种方向对愈伤组织诱导的影响

2.6 暗培养时间对愈伤组织诱导的影响

2.7 培养基对愈伤组织诱导的影响

2.8 激素种类及浓度对愈伤组织分化的影响

3 小结

3.1 外植体对灰枣叶片愈伤组织诱导的影响

3.2 培养基对灰枣叶片愈伤组织诱导的影响

3.3 光照时间对灰枣叶片愈伤组织诱导的影响

3.4愈伤组织分化不定芽

第四章叶片直接分化不定芽

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 试验设计与方法

2 结果与分析

2.1 培养基对叶片分化不定芽的影响

2.2 不同部位叶片对叶片再生不定芽的影响

2.3 同一叶片不同部位对叶片再生不定芽的影响

2.4 接种方向对叶片再生不定芽的影响

2.5 蔗糖浓度对叶片再生不定芽的影响

2.6 培养瓶透气性对叶片再生不定芽的影响

2.7 暗培养时间对叶片再生不定芽的影响

2.8 AgNO3 浓度对叶片再生不定芽的影响

3 小结

3.1 外植体对灰枣叶片直接再生不定芽的影响

3.2 培养基在灰枣叶片再生中不定芽的影响

3.3 AgNO3 的作用

3.4 光照条件对灰枣叶片再生的影响

3.5 培养瓶透气性的问题

3.6 蔗糖的作用

第五章不定根分化不定芽

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 试验设计及方法

2 结果与分析

2.1 不同激素浓度对叶片分化不定根的影响

2.2 不同激素浓度对不定根分化不定芽的影响

3 小结

第八章灰枣叶片再生苗的增殖生根培养

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 试验设计与方法

2 结果与分析

2.1 不同激素配比对不定芽继代增殖影响

2.2 不同激素浓度配比对灰枣再生苗生根的影响

2.3 试管苗生根的动态观察

3 小结

3.1 枣再生曲的增殖

3.2 枣再生苗的生根

第七章结论与讨论

1 有关再生植株发生途径的问题

1.1 愈伤组织分化不定芽

1.2 叶片直接再生不定芽

1.3 不定根分化不定芽

1.4 灰枣离体叶片再生体系的特点

2 有待进一步解决的问题

参考文献

图版