微小隐孢子虫初生犊牛感染试验及分子遗传特性分析研究

摘要

隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是一种全球性的人兽共患寄生虫病，感染广泛的脊椎动物宿主。本试验对河南某地区奶牛隐孢子虫病流行情况作了深入调查，通过对部分牛源隐孢子虫分离株从卵囊形态学、动物感染试验、卵囊排出规律、核糖体小亚基(18SrRNA)基因和PCR-RFLP分析及生物学特性研究，分析鉴定出河南省部分地区牛源隐孢子虫流行种类和基因型，确定了该地区牛源隐孢子虫分离株和其它种类隐孢子虫之间的分子种系进化关系，为预防和治疗人兽共患隐孢子虫病提供了理论依据。
　　 为了解奶牛肠道寄生虫病的流行情况，尤其是人兽共患肠道寄生虫流行情况，采用卢戈氏碘液染色法、饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对商丘地区两个奶牛养殖场共154份新鲜粪便进行调查。结果发现115份样品为阳性样品，总感染率为74.68％(115/154)；其中贾第虫感染率为7.14%(11/154)；隐孢子虫感染率为10.39%(16/154)；球虫感染率为66.23%(102/154)；圆线虫感染率为3.24%(5/154)；毛首线虫感染率为5.19%(8/154)。本次调查为临床治疗和预防奶牛肠道寄生虫病提供了参考和依据。
　　 为建立牛源C.parvum隐孢子虫初生犊牛动物模型，将牛源C.parvum卵囊用导管灌胃接种一头3日龄未吃初乳的荷斯坦公犊牛，对排卵囊规律，临床表现进行观察。试验结果显示潜隐期为2天，高峰排卵囊期出现在感染后第5d，高峰期持续6d。对病牛剖检后刮取消化道黏膜涂片经改良抗酸染色，结果仅在小肠中段发现卵囊。C.parvum寄生于牛的小肠。本试验成功感染犊牛，建立了C.parvum动物模型。
　　 为了解河南省部分地区奶牛隐孢子虫感染率及评估奶牛在隐孢子虫人兽共患传播中的作用。本研究参考1999年，Xiao等建立的方法，对试验二断奶前犊牛镜检阳性样品进一步用巢式PCR扩增进行18SrRNA基因扩增，扩增片段经测序和序列比对。用VspI和SspI酶切该片段，两个酶切图谱显示牛源隐孢子虫与牛源C. parvum酶切后的图谱相同，明显区别于C. bailyei。系统发育分析结果显示，隐孢子虫虫种形成了2个群，1群包括C. serpentis、C. andersoni和C. muris。另一个群包括C. bailyei、C. bovis、C.ryanae、C. meleagridis、C. hominis、C. parvum以及本研究中的2个分离株，2个犊牛分离株和C. parvum处于同一分类单位。本研究表明，该地区奶牛可能在隐孢子虫的人兽共患传播中起一定的作用。