河南省鸡腹泻重要病原菌的分离鉴定与耐药性及PCR检测方法的研究

摘要

鸡腹泻是由多种因为引起鸡的以拉稀、下痢为特征的一类疾病的总称。多年来一直困扰着养鸡业的发展,对经济效益的影响很大,应引起高度重视。引起鸡腹泻的因素多而复杂,但传染性腹泻占主导因素。同时该病是养鸡场的常见病、多发病、并发病,防治最困难的疫病之一。所以,对引起鸡腹泻的重要病原菌尽早做出准确诊断,采取有效的预防和治疗措施成为控制本病的关键。本研究以此为出发点,首先通过常规微生物学方法对鸡腹泻重要病原菌的类型、各病菌所占的比例、生化特性、致病性、血清型和耐药性进行调查分析,并建立了病原菌的PCR检测方法,并进行临床应用,旨在为鸡腹泻的诊断提供重要条件和可靠依据。
　　 本课题从河南省20个地区94个鸡场采集的310份鸡腹泻病料为研究材料,开展了鸡腹泻重要病原菌的研究,并取得了预期结果:
　　 1、通过微生物学常规诊断方法,对来自河南省的152只鸡的310份鸡腹泻病料进行重要病原菌的分离鉴定。鉴定出124株大肠杆菌,占40％(124/310)；83株疑似鸡志贺氏菌,占26.77％(83/310)；62株疑似鸡沙门氏菌,占20％(62/310)；41株链球菌,占13.23％(41/310)。在分离的四种重要病原菌中,混合感染的比例占48.02％(149/310),单独感染的比例为占51.97％(161/310)。并对所分离的菌株进行了致病性试验,表明所分离的病原菌大部分都有较强的致病性。
　　 2、对所分离到的124株大肠杆菌选取94株进行血清学试验,表明大肠杆菌的优势血清型为O14、O157、O74,占定型菌株的57.45％(54/94),其次为O1、O8、O9、O141,占定型菌株的24.46％(23/94)；83株疑似鸡志贺氏菌鉴定出18株为鸡志贺氏菌,其中优势血清型为鲍氏型和福氏型,分别占38.89％(7/18)和33.33％(6/18)；62株疑似鸡沙门氏菌中14株为鸡沙门氏菌,其中鸡白痢沙门氏菌占主导,比例为64.29％(9/14)；41株鸡链球菌中,以D血清群禽链球菌最多,占73.17％(30/4.1)。
　　 3、通过纸片扩散法,对分离的病原菌用14种抗生素进行药敏试验,结果表明,四种病原菌的耐药性都非常严重,均为10～13耐居多,鸡大肠杆菌、鸡沙门氏菌、鸡志贺氏菌、鸡链球菌分别占35.11％(33/94)、41.18％(14/34)、45.16％(28/62)、73.17％(30/41),且产生严重的交叉耐药现象,均对大环内酯类罗红霉素的耐药率最高。除此之外,大肠杆菌主要对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、头孢唑啉等耐药率高；沙门氏菌主要对喹诺酮类药物和磺胺甲嗯唑/甲氧苄啶耐药；志贺氏菌对喹诺酮类药物和米诺环素耐药严重；链球菌对林可酰胺类和喹诺酮类耐药性强。
　　 4、PCR检测方法的研究中,通过uid基因建立鸡大肠杆菌的PCR检测方法,对分离的124株大肠杆菌进行检测,阳性率为90.32％(112/124):通过invE基因建立鸡沙门氏菌的PCR检测方法,检测14株沙门氏菌,阳性率为100％(14/14)；通过ipaH基因建立鸡志贺氏菌的PCR检测方法,检测18株志贺氏菌,阳性率为100％(18/18)。以上结果表明所建立的PCR检测方法特异性强、敏感性高、准确、可靠等优点,可用于鸡腹泻重要病原菌的检测和流行病学调查,具有很高的应用价值。