鸡卵细胞卵黄生成受体(VLDLR/OVR)基因多态性检测及其与鸡蛋胆固醇含量的关联性分析

摘要

本研究以丝羽乌骨鸡为试验素材，研究与鸡蛋胆固醇含量调控相关候选基因VLDLR/OVR基因的单链核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphisms，SNPs)及其与蛋品质性状之间的关联性。
　　 首先，进行蛋品质性状测定并采用高效液相色谱法测定鸡蛋胆固醇含量，然后，提取鸡翅静脉基因组DNA，构建DNA池，依据NCBI和Ensembl数据库确定VLDLR/OVR基因5’-侧翼区的碱基序列，进行测序，对鸡VLDLR/OVR基因的遗传变异位点进行筛选。在此基础上，应用PCR-RFLP技术，对5’-侧翼区的4个SNP位点g.8355T>C、g.9511G>A、g.9815C>G、g.10428T>C进行群体遗传学分析，并用SPSS19.0分析这4个多态位点与蛋黄胆固醇含量之间的相关性，从而为低胆固醇蛋鸡品系的育种工作提供分子标记。经研究发现：
　　 1.构建了鸡翅静脉提取的基因组DNA池，进行极端性状混合DNA池测序，在5’-侧翼区中发现21个可能的多态位点。
　　 2.以极端性状混合DNA池测序结果为基础，应用PCR-RFLP技术检测5’-侧翼区的4个SNP位点g.8355T>C、g.9511G>A、g.9815C>G、g.10428T>C。测序结果表明4个SNP位点分别是T/C、G/A、C/G、T/C突变，都有2个等位基因，3种基因型。
　　 3.经卡方检验表明，g.8355T>C、g.9815C>G位点处Hardy-Weinberg非平衡状态，g.9511G>A、g.10428T>C位点处于Hardy-Weinberg平衡状态。遗传多态性分析表明：g.8355T>C、g.9511G>A、g.9815C>G和g.10428T>C四个位点多态信息含量分别为：0.324、0.349、0.367和0.311，均为中度多态性位点，其中g.9815C>G位点的多态性最高，变异程度最大。总体反映了该群体具有较为丰富的遗传多样性。
　　 4.统计分析表明，丝羽乌骨鸡VLDLR/OVR基因5’-侧翼区中g.9815C>G位点与蛋重(EW)、蛋黄重(YW)显著关联(P<0.05)，与蛋壳比例(ESR)极显著关联(P<0.01)；g.8355T>C位点与蛋壳重(ESW)显著关联(P<0.05)；但两位点对蛋黄胆固醇含量和全蛋胆固醇含量均无显著影响。g.9511G>A位点与蛋黄胆固醇含量和全蛋胆固醇含量表现为极显著关联(P<0.01)，与蛋黄颜色(YC)、蛋黄重(YW)表现为显著关联(P<0.05)。对选育低胆固醇蛋鸡品系来说，G等位基因为优势等位基因，GG型为优势等位基因型。g.10428T>C位点与蛋黄胆固醇含量和全蛋胆固醇含量显著关联(P<0.05)，对选育低胆固醇蛋鸡品系来说，T等位基因为优势等位基因，TT型为优势等位基因型。