PCV2与PPV共感染对猪外周血单个核细胞细胞因子转录时相影响研究

摘要

猪细小病毒(Porcineparvovirus，PPV)和猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype2，PCV2)引起初产母猪产出死胎、畸形胎、木乃伊胎以及母猪的繁殖障碍。PCV2还可以引起新生仔猪肺炎、生长迟缓等，也是导致感染猪发生免疫抑制的主要病原，且这2种病普遍存在于国内外的养殖场，严重影响和制约着养猪业的发展。本研究通过分析PPV与PCV2共感染猪体外周血单个核细胞中免疫相关细胞因子mRNA转录的动态变化，以揭示PPV与PCV2共感染对猪免疫功能的影响及其致病机理。
　　 1采用Real-timePCR技术对PPV、PCV2单感染和PPV/PCV2共感染猪PBMCs后1、3、12、24、48和72h中PPV、PCV2的DNA含量进行检测。结果显示：PPV、PCV2在感染后1h能检测到病毒核酸，且PPV/PCV2共感染组中PCV2含量高于PPV、PCV2单感染组。由此说明：PPV与PCV2共感染对PCV2在PBMCs内的增殖具有促进作用。
　　 2采用Real-timePCR技术对PPV、PCV2单感染与PPV/PCV2共感染猪PBMCs后1、3、12、24、48和72h中PPV、PCV2的DNA含量及白细胞介素细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12p35、IL-12p40、IL-13、IL-17、IL-18)mRNA转录水平进行检测。结果显示，IL-1β、IL-6、IL-13、IL-8和IL-17细胞因子在病毒感染后其转录水平均较高，并且共感染比PPV、PCV2单感染组高，而IL12p35、IL-12p40和IL-18细胞因子在病毒感染后其转录水平均较低或受到抑制。由此表明：PPV/PCV2共感染组比PPV、PCV2单感染组更能刺激炎症的发生，同时共感染对细胞的免疫抑制具有加重作用。
　　 3采用Real-timePCR技术对PPV、PCV2单感染和PPV/PCV2共感染猪PBMCs后1、3、12、24、48和72h干扰素相关因子(IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR-2、MX1、2’5’OAS、RNaseL、IRF-3)mRNA转录水平进行检测。结果显示：病毒感染猪PBMCs后IFN-β和IFN-γmRNA转录水平在多个时间点转录水平高于单感染，但是IFN-γmRNAPPV/PCV2共感染组低于对照组。病毒组的IFNAR-1mRNA转录水平均有多个时间点低于对照组；PPV/PCV2共感染组IFNAR-2mRNA感染后期IFNAR-2mRNA转录水平低于PPV、PCV2单感染组。病毒在感染PBMCs后PPV/PCV2共感染组IRF-3mRNA感染初期高于PPV、PCV2单感染组，感染后期低于PPV、PCV2单感染组，但与对照组变化不显著。由此表明：干扰素因子的转率水平整体较低，且在初期发挥作用，而后期处于抑制作用，PPV/PCV2共感染对细胞的免疫抑制具有加重作用。对干扰素的效应分子的分析认为，MX1、2'5’OAS/RNaseL2个效应系统都参与了PPV的抗病毒反应，而PPV/PCV2共感染组和PCV2的抗病毒效应分子主要是MXI蛋白。
　　 4采用Real-timePCR技术对PPV、PCV2单感染和PPV/PCV2共感染猪PBMCs后1h、3h、12h、24h、48h、72h抗病毒相关因子(MIP-1α、TGF-β1、NF-κB、MURR1)mRNA转录水平进行检测。结果显示：病毒感染后期MIP-1α、TGF-β1、NF-κB、MURR1mRNA上调。且PCV2单感染组高于PPV/PCV2共感染，提示可共感染对机体的免疫抑制具有加重作用。