板蓝根、黄芪多糖与干扰素对猪伪狂犬病病毒的体外作用研究

摘要

目的与意义:通过体外试验测定板兰根多糖、黄芪多糖与干扰素联合应用对猪伪狂犬效果研究，从而给伪狂犬病的预防及治疗提供一种新的可行方法。
　　采用了常规的水煎醇沉法来提取多糖，然后使用蒽酮硫酸法来测定多糖的含量，从而得到板蓝根多糖和黄芪多糖;体外构建重组质粒pGEX-IFN-α，并将其转化入大肠杆菌BL21后，经IPTG的诱导下，在大肠杆菌中表达出猪α干扰素融合蛋白。SDS-PAGE和Westernblotting分析，优化IPTG的浓度和诱导时间，提高表达水平。通过形态观察法、MTT法判断板蓝根多糖、黄芪多糖、干扰素以及多糖与干扰素的联合应用对猪伪狂犬病病毒的抑制效果。板篮根多糖、黄芪多糖和干扰素半数抑制浓度分别为250μg/ml、500μg/ml和100.7U/ml。测定了药物联合应用的合并指数，结果表明板蓝根多糖125μ g/ml、黄芪多糖250μg/ml、和重组猪α干扰素50U/mL三者联合使用时，抑制病毒的效果最好，猪伪狂犬病病毒的抑制率达到70.26％。

目录

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致谢

摘要

文献综述

1 干扰素的发展现状

1．1 干扰素的定义

1．2 干扰素的分类及特点

1．3 干扰素的临床应用

1．4 干扰素的开发现状

2 板蓝根多糖

2．1 板蓝根多糖的免疫调节作用

2．2 板蓝根多糖构效关系研究

2．3 板蓝根研究新方向

2．4 板蓝根多糖在畜牧兽医中的应用

2．5 板蓝根多糖研究应用中的一些问题

3 黄芪多糖

4 猪伪狂犬病

4．1 病原学

4．2 流行病学

4．3 发病机制

4．4 猪伪狂犬病的免疫及防控

试验一 板蓝根多糖与黄芪多糖的制备

1 试验材料与方法

1．1 试验材料

1．2 试验方法

2 结果与分析

2．1 中药多糖的提取率和净含量

3 讨论

试验二 干扰素的制备及其大量制备

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 主要试剂

1．3 引物设计及合成

1．4 肝组织基因组的提取

1．5 猪α干扰素基因的PCR扩增

1．6 纯化回收DNA片段

1．7 PCR产物的连接

1．8 制备感受态细胞

1．9 连接产物的转化入感受态细胞

1．10 挑取菌落

1．11 大肠杆菌质粒提取

1．12 重组质粒的鉴定

1．13 重组质粒命名

1．14 重组质粒的序列测定及分析

1．15 构建原核表达载体pGEXIFN-α

1．16 制备感受态细胞BL21

1．17 连接产物的转化入感受态细胞

1．18 重组表达质粒pGEXIFN-α的鉴定

1．19 重组质粒pGEX-IFN-α的诱导表达

1．20 表达产物的检测

1．21 重组猪IFN-α的纯化

2 结果与分析

2．1 重组表达质粒鉴定结果

2．2 干扰素基因的表达及鉴定

3 讨论

试验三 猪α干扰素抗猪伪狂犬病毒活性检测

1 材料和方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果和分析

2．1 PRV病毒毒力测定

2．2 重组干扰素蛋白含量及其病毒效价

2．3 干扰素对PK-15细胞无毒浓度

3 讨论

试验四 板蓝根多糖、黄芪多糖与猪α干扰素联合应用对猪伪狂犬病病毒作用的研究

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 试验方法

2 结果与分析

2．1 PRV毒力测定结果

2．2 多糖对PK-15细胞的安全浓度

2．3 中药多糖抑制PRV增殖试验结果

3 结论与讨论

全文总结

参考文献