2011～2014年河南省鸡群马立克氏病病毒流行株的分子进化及基因重组分析

摘要

马立克氏病病毒(Marek's disease virus，MDV)是少数感染自然宿主后，可诱发淋巴瘤的禽疱疹病毒之一，其感染引起的鸡马立克氏病(Marek's disease，MD)也是最早可以用抗病毒疫苗来预防肿瘤发生的疾病。为了解鸡MDV流行毒株的分子特征，本研究对2012-2014年河南省发病鸡群的临床病料进行了采集，并对MDV132 bp重复序列进行了PCR扩增，同时对meq、gE和gI基因进行了克隆和序列测定。结果表明，9份病料中均可扩增出与132 bp双拷贝大小相符的PCR主产物;meq、gE和gI基因的核苷酸序列同源性与国内外参考毒株相比，分别为98.5％～100％、98.8％～100％和98.0％～100％;基于这些基因构建系统发生树的分析结果表明，与美国、澳大利亚、日本以及印度的MDV分离株相比，目前河南鸡群中流行的MDV与此前分离的河南流行株进化关系较近，并且与其他国内分离株共同形成一个较大的独立进化分支。
　　除了MDV，禽网状内皮增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus，REV)也是导致家禽免疫抑制性疾病和肿瘤病最重要的病原之一。由于MDV和REV具有相似的组织嗜性，常混合感染于同一鸡群，因此这两种病毒的共感染对家禽养殖业危害巨大。此前研究表明，MDV基因组中可人工或自然重组REV的部分基因组片段，如长末端重复序列(long terminalrepeat，LTR)，这种重组对MDV的病原学特性可能具有重要影响。为了解国内鸡群MDV和REV的共感染和自然重组状况，本研究对分离自河南商品蛋鸡群的17个MDV分离株进行了分析，结果发现其中HNGS206和HNXZ103的病毒基因组中存在REV-LTR的重组插入。进一步的研究表明这两个毒株不是MDV与REV自然重组的流行毒株，其基因组中LTR的插入可能发生于临床病例鸡共感染后的病毒分离培养过程中。本研究的结果提示河南鸡群中MDV和REV的共感染较为普遍，但MDV与REV自然重组毒株的流行状况仍需要进一步的流行病学监测。

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英文缩略词表

摘要

1 文献综述

1．1 马立克氏病

1．2 MDV的病原学

1．2．1 MDV的分类

1．2．2 MDV的基因组结构

1．2．3 MDV的致病过程

1．3 MDV的流行病学

1．3．1 MDV流行特征

1．3．2 MDV与REV的共感染及重组

1．4 MD的诊断及防控

1．4．1 MDV的诊断

1．4．2 MDV的防控

2 引言

3 材料与方法

3．1 材料

3．1．1 病毒与细胞

3．1．2 载体与菌株

3．1．3 主要仪器设备

3．1．4 商品化的材料和试剂

3．1．5 自行配制的主要试剂

3．1．6 其他试剂

3．2 方法

3．2．1 病料采集

3．2．2 病毒培养

3．2．3 DNA提取

3．2．4 RNA提取

3．2．5 引物设计

3．2．6 cDNA合成

3．2．7 PCR扩增

3．2．8 基因克隆及序列分析

3．2．9 系统发生树分析

3．2．10 间接免疫荧光试验

4 结果与分析

4．1 MD疑似病例鸡的临床症状及剖检病变

4．2 组织病料中MDV部分病毒基因的PCR扩增结果

4．3 meq、gE和gI基因PCR产物的序列测定及分析

4．4 基于meq、gE及gI基因的分子进化分析

4．5 MDV分离株gE基因及REV-LTR的PCR结果

4．6 MDV分离株REV-LTR的PCR产物测序结果

4．7 MDV分离株中REV gag和pol基因的RT-PCR结果

4．8 MDV分离株中REV的IFA检测结果

4．9 MDV分离株中REV共感染及LTR重组的溯源分析结果

5 结论与讨论

5．1 河南鸡群MDV与国内其他MDV分离株形成独立进化分支

5．2 河南鸡群中存在一定程度的MDV与REV的共感染

5．3 高效的MD疫苗防控策略仍需进一步的研究探讨

参考文献

研究生期间已发表的论文