日本雪椿组织培养再生体系的建立

摘要

为了解决日本雪椿引进困难，种子和种苗来源不足，难以满足林业建设和构建生态文明社会的需求，本实验以雪椿叶片和茎段作为外植体，研究其再生植株体系，获得改良的雪椿外植体最佳消毒方式及时间，有效减轻雪椿试验材料褐变的方法，雪椿再生体系建立的培养条件，雪椿愈伤组织诱导、增殖及分化的最佳激素配比，茎段诱导芽及芽增殖的最佳激素配比，再生植株生根方式方法。主要研究结果如下：
　　（1）雪椿外植体最佳消毒组合及时间
　　选取生长健壮的雪椿植株，剪取雪椿两年生枝条嫩梢的茎段用自来水清洗30min，洗去浮尘，然后用洗洁精进一步清洗，再用自来水将洗洁精残留冲洗干净，然后置于无菌室超净工作台上，用无菌水清洗1min，再用75％的乙醇浸泡20-30s，后用无菌水冲洗2次，放入0.1%HgCl2中，8min，取出后用无菌水冲洗5遍，置于无菌滤纸上吸干水分，接种于附加不同植物生长调节剂的MS培养基上做初代培养。
　　（2）雪椿愈伤组织诱导，增殖及分化的最佳激素配比
　　MS+6-BA2.0mg/L-1+2,4-D0.5mg/L-1培养基是雪椿新生叶片愈伤组织诱导的最佳培养基，MS+6-BA15mg/L-1+IBA0.5mg/L-1是叶片诱导愈伤组织的最佳增殖培养基；MS+6-BA3mg/L-1+NAA0.2mg/L-1+IBA0.5mg/L-1是愈伤组织分化的最佳培养基；茎段诱导的愈伤组织具备分化不定芽的潜能。
　　（3）茎段诱导芽及芽增殖的最佳激素配比
　　在添加6-BA2.0mg/L-1+IBA0.5mg/L-1的MS诱导培养基中，以雪椿的嫩茎段为外植体，芽的诱导率达到97%，MS+6-BA2mg/L-1+NAA0.15mg/L-1+ZT2.0mg/L-1，MS+6-BA3mg/L-1+IBA0.5mg/L-1+NAA0.5mg/L-1适合不定芽的增殖培养，增殖系数分别达到83.2%和79.5%。
　　（4）雪椿植株的生根方式
　　日本雪椿不定芽生根的诱导方法是试管外滤纸桥生根法，该技术在温度20-30℃、湿度为85%~95%，苗子基部在激素NAA或者IBA1000mg/L下浸泡20min后，使用1/5MS培养液，制作生根培养箱培养，可提高苗的生根率，苗木生长健壮旺盛。

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中文摘要

1.文献综述

1.1 日本雪椿的地理分布与中国山茶的渊源异同

1.2 山茶属植物组织培养研究进展

1.3 山茶属植物组织培养中污染及褐化现象

1.4山茶属植物组织培养中愈伤组织诱导、增殖与分化的过程

1.5 山茶属植物组织培养中芽苗诱导与增殖，壮苗与生根的过程

1.6 山茶属植物组织培养中的主要影响因素

2 引言

3 材料与方法

3.1 不同消毒方式和时间对雪椿外植体的影响

3.2雪椿愈伤组织诱导、增殖与分化不定芽

3.3不同激素配比对愈伤组织继代增殖的影响

3.4愈伤组织诱导不定芽

3.5茎段诱导芽

3.6芽增殖

3.7壮苗与生根

4 结果与分析

4.1不同消毒方式和时间对雪椿外植体的影响

4.2不同外植体类型、不同类型激素及配比对雪椿愈伤组织诱导的影响

4.3不同激素配比对愈伤组织继代增殖的影响

4.4愈伤组织诱导不定芽

4.5不同激素配比对茎段诱导芽的影响

4.6不同激素配比对芽增殖的影响

4.7壮苗与生根

5 结论与讨论

5.1结论

5.2讨论

参考文献

英文摘要