铅暴露对PC12细胞内IGF1R、IGFBP3、Aβ40及Aβ42表达的影响

摘要

目的:探讨铅暴露及IGF1R抑制剂(AG1024)对PC12细胞内IGF1R、IGFBP3表达的影响，明确诱发AD的相关蛋白的作用机制，是否通过它们的调节作用，从而为铅中毒的预防和治疗提供理论指导。
　　方法:用PC12神经元细胞株进行培养建立相应的铅暴露模型，分别用不同浓度的乙酸铅处理细胞，把实验分为对照组、1μmol/L PbAc、10μmol/L PbAc组、IGF1R抑制剂(AG1024)组、IGF1R抑制剂组(AG1024)+1μmol/L PbAc组、IGF1R抑制剂组(AG1024)+10μmol/L PbAc组，分别染毒三个时间段24h、48h和72h，MTT法测定铅暴露剂量对细胞增殖的影响，分别通过western blot技术和细胞免疫化学法检测各组PC12细胞中IGF1R，IGFBP3的蛋白表达情况，ELISA法测定细胞上清液中Aβ40、Aβ42表达。MTT结果显示，这三个时间段用不同浓度的PbAc处理细胞显示处理组的OD490值与暴露浓度呈显著相关性，暴露浓度越高，吸光度值显著下降，与对照组相比同一处理时间的组别中，只有低剂量暴露的0.1μmol/L组没有显著性差异，其余差异均具有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果显示，与对照组相比，低剂量铅暴露组（0.1μmol/L）IGF1R蛋白表达无显著差异，P＞0.05，在高剂量醋酸铅中IGF1R蛋白的表达则明显著低于对照组，差异具有统计学意义，P＜0.05，中高浓度铅暴露显著抑制了细胞体系中IGF1R蛋白的表达，暴露剂量升高幅度越大越快，产生的抑制效应越发明显。细胞免疫染色结果显示，IGF1R细胞免疫荧光阳性反应主要定位于胞浆，10μmol/L剂量铅暴露组IGF1R免疫荧光抗体的平均光密度和神经元活性较对照组显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，且显著性差异下降趋势最为明显;AG1024抑制剂与铅联合组（1μmol/L）和（10μmol/L）与对照组相比显著降低，组间具有统计学意义(P＜0.05);铅暴露组IGFBP3蛋白活性与对照组IGFBP3蛋白活性相比，呈明显的下降趋势。10μmol/L剂量铅暴露组IGFBP3免疫荧光抗体的平均光密度和神经元活性较对照组显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。ELISA结果显示:铅暴露组与对照组相比，细胞上清液中Aβ40和Aβ42的含量在各组间差异无统计学意义，P＞0.05。
　　结论:铅明显下调IGF1R和IGFBP3的表达，铅与抑制剂联合抑制细胞增殖，促进细胞凋亡的趋势，造成神经系统的损伤。

目录

声明

致谢

摘要

1 文献综述

1．1 铅

1．2 食源性铅污染来源

1．3 铅对神经系统的影响

1．4 铅与AD

1．5 AD与Aβ

1．6 AD与IGF

1．7 IGF1与IGFBP3

1．7．1 AD与IGFBP3

1．7．2 IGFBP3生物学作用

1．8 AD与IGF1R

前言

第一部分 铅暴露对PC12细胞生长发育的影响

1 实验材料

1．1 试剂及仪器

1．2 溶液的配置

2 方法

2．4 MTT法检测PC12细胞的增殖情况

2．5 细胞增殖抑制率计算

2．6 数据处理

3．2 PC12细胞抑制率结果分析

第二部分 铅暴露对PC12细胞内IGF1R蛋白表达的影响

1 材料与方法

1．1 试剂及仪器

2 细胞实验分组

3 Western Blot测定IGF1R蛋白表达水平

3．2 western blot

3．3 细胞免疫荧光染色

3．4 数据处理

5 免疫荧光法测定IGF1R蛋白在各实验组的差异表达

第三部分 铅暴露对PC12细胞内IGFBP3蛋白表达的影响

1 实验材料

1．1 试剂及仪器

2．1 细胞爬片

2．2 免疫荧光染色

3 结果分析

3．1．免疫荧光法测定IGFBP3蛋白在各实验组的差异表达

第四部分铅暴露对PC12细胞液Aβ40和Aβ42蛋白表达的影响

1 实验材料

1．1 试剂及仪器

2．1 ELISA基本原理

2．2 操作步骤

2．3 结果判断

3 统计分析

4 结果分析

4．1 不同铅暴露组Aβ1-40、Aβ1-42的含量的变化情况

五 讨论

六 结论

参考文献