CCl4诱导的小鼠急性肝损伤过程中与细胞增殖、凋亡及代谢相关分子的动态变化

摘要

目的：研究CCl4诱导的小鼠急性肝损伤过程中与细胞增殖、凋亡及代谢相关分子的动态变化，并探讨其作用的可能机制。
　　方法：试验共分为10组：正常对照组1组；CCl4模型组9组（CCl4溶于橄榄油中，浓度为0.1％，腹腔注射0.1mL/10g），分别在造模后3，6，12，24，30，36，42，48，54h时取材。检测上述10组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ alanine aminotransferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase， AST）活性的变化趋势；各组小鼠肝组织的病理切片检测；用Western blotting法检测各组小鼠肝组织PCNA、Bcl-2、Bax、CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4、TNF-α、IL-6和HSP70蛋白的表达以及变化趋势。统计分析采用SPSSl3.0软件包，实验数据以均值±标准差（Mean± SD）表示，显著性分析采用ANOVA，组间比较采用Duncan’s test进行分析处理，P<0.05为差异有统计学意义。
　　结果：和对照组小鼠相比较，模型组小鼠血清ALT和AST水平均显著升高(P<0.05)，在36h达到高峰。肝损伤之后，小鼠肝脏失去其正常结构，在36h肝组织损伤最为显著。CCl4诱导小鼠急性肝损伤3，6，12，24，30，36，42，48，54h之后肝PCNA、Bcl-2、Bax、CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4、TNF-α、IL-6和HSP70蛋白的表达均呈明显变化趋势(P<0.05)。PCNA在CCl4处理后3h至24h明显降低，从30h时升高，到42h达到最高点，然后又逐渐降低，54h时向正常水平恢复。Bcl-2在CCl4处理后明显降低，在24h时达到最低点，然后开始升高但未恢复至正常水平，到48h和54h又再次降低；Bax在CCl4处理后先升高，在12h达到高峰，然后降低，并逐渐向正常水平恢复。CYP1A2和CYP3A4在CCl4处理后3h时均明显降低，然后开始升高但未恢复至正常水平，到48h和54h又再次降低；CYP2E1在CCl4处理后先升高，在12h达到高峰，然后降低，在30h达到最低点，此后逐渐向正常水平恢复。HSP70在CCl4处理后3h至12h先升高，24h时降低，30h达到最低点，然后再升高。IL-6在CCl4处理后3h至12h逐渐降低，24h时升高，30h达到最高点，然后又逐渐降低，54h时仍高于正常水平；TNF-α在CCl4处理后先逐渐升高，30h达到高峰，然后又逐渐降低，但54h时并未恢复至正常水平。
　　结论：
　　1.小鼠染毒CCl4后，血清ALT和AST活性水平明显升高，肝组织结构有不同程度的损伤。在36h时，上述2种酶活性水平最高，组织结构损伤最明显，肝损伤最严重。
　　2. CCl4诱导小鼠急性肝损伤后肝组织PCNA、Bcl-2、Bax、CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4、TNF-α、IL-6和HSP70蛋白的表达均呈明显变化趋势，这9种分子在此过程中可能起到重要作用。
　　3.本课题组首次发现人CYP3A4同工酶（或类似物）在小鼠体内表达。

目录

第1章 综述

1.1脂质过氧化反应

1.2与肝损伤相关的酶

1.3细胞因子

1.4凋亡和抗凋亡

1.5增值和修复

第2章 引言

第3章 材料与方法

3.1实验材料

3.2实验仪器

3.3实验试剂及配置

3.4实验方法

3.5统计方法

第4章 结果

4.1血清ALT和AST活性检测

4.2肝脏病理组织学观察

4.3目标蛋白检测

第5章 讨论

5.1损伤后血清酶的变化和肝病理组织学变化

5.2损伤后肝细胞的增值变化

5.3损伤后的肝细胞的凋亡变化

5.4损伤后的代谢变化

5.5损伤后的细胞因子及热休克蛋白的变化

5.6问题与展望

第6章 结论

参考文献

缩略语词汇表

附录图表

致谢

攻读硕士学位期间的研究成果