炎症调控因子GSK-3β在食管癌发生发展中的作用及预后研究

摘要

目的:本实验主要研究 GSK3β及 STAT3在食管鳞癌中的表达情况，探讨其与食管鳞癌临床病理特征和预后的关系；检测GSK3β及STAT3抑制剂对食管鳞癌细胞系生长增殖、迁移能力及裸鼠成瘤能力的影响，分析 GSK-3β与 STAT3两者之间的潜在调控关系，探讨其对食管癌发生发展的作用机制。
　　方法:采用RT-PCR和Western blotting的方法检测GSK3β在食管癌及癌旁组织中 mRNA和蛋白水平的表达。采用免疫组织化学法检测 GSK3β及 STAT3在食管癌及癌旁组织中的表达情况。分析GSK3β及STAT3的表达与食管癌患者临床病理特征及预后之间的关系。同时采用 RT-PCR检测 GSK3β在不同分化食管癌细胞系中的表达情况。应用 MTT试验、Wound Healing试验检测 GSK3β及STAT3抑制剂对食管癌细胞系生长增殖、迁移能力的影响。将食管癌细胞株KYSE70细胞注射至裸鼠皮下，通过裸鼠成瘤实验，将GSK3β和STAT3抑制剂注射至裸鼠体内，观察其对裸鼠成瘤时间、瘤体大小的影响。应用免疫组化检测不同药物处理组裸鼠肿瘤组织中 GSK3β、STAT3、P-STAT3的表达变化。所有统计数据分析应用SPSS17.0软件进行统计，统计结果以P<0.05为差异有统计学意义。
　　结果:
　　1．RT-PCR结果显示，与相应癌旁组织相比，GSK3βmRNA在食管癌组织中表达明显升高，同时，在不同分化程度的食管癌细胞系(ESC)中检测其mRNA水平，结果显示GSK3β mRNA在低分化ESC中(KYSE70)的表达显著高于高、中分化的ESC(KYSE30，EC9706，KYSE140)。Western blotting结果显示，与相应癌旁组织相比，GSK3β蛋白在食管癌组织中表达明显升高，然而磷酸化后的 GSK3β(P-GSK3βSer9)在癌旁组织中却明显升高，差异均具有统计学意义。免疫组化结果显示GSK3β及STAT3的阳性表达均呈棕黄色颗粒，主要定位于胞质，部分胞核亦可见着色。在50例食管癌组织、相应癌旁组织中GSK3β的表达阳性率分别为64％、18%，差异有统计学意义，GSK3β的阳性表达与性别、肿瘤分化程度及淋巴结转移有关，具有显著的统计学差异；STAT3的阳性表达率分别为66%、42%，差异亦有统计学意义， STAT3的阳性表达与淋巴结转移、浸润深度、TNM分期相关。且 GSK3β及 STAT3表达呈正相关。随后将 RT-PCR、Western blotting、免疫组化结果进行相关性分析，结果表明 GSK3β在 mRNA及蛋白水平表达具有一致性。
　　2．对50例食管癌病人进行随访，结果显示 GSK3β阳性组和阴性组30个月生存率分别为56.3%和83.3%；STAT3阳性组和阴性组生存率分别为51.4%和86.6%，Kaplan-Meier生存分析表明，与阴性组相比，GSK3β和 STAT3阳性表达组均预后较差。
　　3．体内外实验表明，应用 GSK3β及 STAT3抑制剂后，均可以抑制食管癌细胞系 KYSE30及 KYSE70细胞及裸鼠移植瘤的生长，且两种抑制剂合用后其抑制效果更加明显。免疫组化结果表明，应用GSK3β及STAT3抑制剂后，与对照组相比，GSK3β、STAT3、P-STAT3的表达均发生变化。其结果提示 GSK3β可能潜在调控STAT3进而影响食管癌的发生、发展。
　　结论:
　　1．GSK-3β及STAT3在食管癌组织中的表达明显高于食管癌旁组织，提示其可能参与食管癌的发生、发展。且两者在食管癌的发展中可能具有协同作用； GSK3β及STAT3可能成为食管癌患者预后的指标。
　　2．GSK3β及 STAT3抑制剂抑制了食管鳞癌细胞的增殖、迁移能力及裸鼠移植瘤的生长；GSK3β可能潜在调控 STAT3影响食管鳞癌的发生发展，两因子可能成为食管鳞癌治疗的分子靶标。

目录

声明

第1章 绪论

1.1 研究背景

1.2 研究目的

1.3 研究意义

第2章 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

第3章 结果

3.1 实时荧光定量RT-PCR结果

3.2 免疫组化结果

3.3 Western blotting结果

3.4 GSK3β及STAT3表达对食管癌患者预后的影响

3.5 GSK3β及STAT3抑制剂抑制了食管癌细胞系的增殖

3.6 GSK-3β及STAT3抑制剂抑制食管癌细胞的迁移能力

3.7 GSK3β-STAT3信号通路抑制剂抑制了小鼠食管癌移植瘤的生长增殖

第4章 讨论

4.1 GSK3β及STAT3在食管癌、癌旁组织中的表达及临床意义

4.2 GSK3β及STAT3抑制剂对食管癌细胞增殖、迁移能力及裸鼠移植瘤模型的影响

4.3 GSK3β抑制剂抑制肿瘤的作用机制

第5章 结论

参考文献

缩略语词汇表

致谢

攻读学位期间的研究成果