牡丹组培快繁技术的研究

摘要

牡丹观赏价值高的品种，雄蕊、雌蕊大都高度瓣化，导致种子发育不全或无结实力，而传统分株、嫁接繁殖方法，繁殖系数低且周期长。采用组培技术可在短时间内获得大量试管苗，既为牡丹新品种培育和定向改良提供遗传转化再生体系，又为牡丹种苗商品化提供技术支持和理论依据。
　　本研究以黄色系牡丹中的中晚期品种金阁和海黄为研究对象，以主茎基部鳞芽为外植体，研究了不同取材时期对牡丹试管苗生长的影响，筛选出了外植体最佳取材时期；探讨了不同种类和浓度的生长调节物质对牡丹试管苗增殖及生根的影响，并得出了最适宜其增殖和生根的激素配比；分析了在增殖培养过程中AgNO3对其增殖和褐化的影响，测定了引起褐化的相关生理生化指标。主要研究结果如下：
　　（1）以金阁和海黄的鳞芽为外植体，从2013年10月到2014年4月，每月20日取样。将鳞芽接种在MS培养基附加0.6 mg/L6-BA和0.2 mg/L NAA中培养，观察取材时间对牡丹金阁和海黄组培污染率和褐化率以及苗体生长的影响。结果表明：从10月份到翌年4月份均可用牡丹鳞芽进行组培快繁，以3-4月的外植体生长最好，冬前10到11月的牡丹鳞芽需要进行适当的低温与黑暗诱导，以便解除牡丹鳞芽的休眠状态。每年3-4月份是牡丹组织培养的鳞芽外植体最佳取材时期。
　　（2）对比金阁和海黄增殖培养的单因素试验和正交试验结果可以看出，单独使用一种激素对牡丹的增殖有一定作用，激素复配可使两个品种的增殖系数均大于单独使用。牡丹金阁最佳增殖培养基组合为MS+6-BA0.6 mg/L+ NAA0.2 mg/L+ KT0.9 mg/L+ TDZ0.06 mg/L，牡丹海黄最佳增殖培养基组合为：MS+6-BA0.9 mg/L+NAA0.3 mg/L+KT0.9 mg/L+TDZ0.04 mg/L。其对金阁增殖影响 TDZ＞KT＞6-BA＞NAA，而对海黄增殖影响6-BA＞KT＞TDZ＞NAA。
　　（3）培养基附加不同浓度 AgNO3，显著抑制金阁和海黄试管苗的褐变。在增殖培养基中附加1 mg/L和2-3 mg/L的 AgNO3能有效抑制金阁和海黄试管苗的褐变，也抑制了其增殖。随着 AgNO3浓度的增加，金阁和海黄试管苗褐化度呈现先下降后升高趋势且与SOD、POD和CAT活性呈显著负相关关系，与试管苗 MDA含量、乙烯释放速率、PPO活性、O2·-产生速率和多酚含量呈显著正相关关系。但将在不同 AgNO3浓度处理20 d后的金阁和海黄试管苗转接到不含 AgNO3的最适增殖培养基上继续培养，不仅能有效抑制试管苗的褐化还能促进其增殖，其中1 mg/L AgNO3预处理的金阁试管苗增殖系数达到最大为4.6倍，而2-3 mg/L AgNO3预处理海黄试管苗的增殖系数略有增加。
　　（4）在金阁和海黄的生根培养中，IBA是主要因素。金阁最佳生根培养基组合为1/2MS+IBA4 mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭1g/L，海黄最佳生根培养基组合为1/2 MS+IBA6 mg/L+NAA0.1mg/L+活性炭2g/L。

目录

声明

符号表

第1章 文献综述

1.1 牡丹

1.2 牡丹组织培养研究进展

1.3 牡丹组培过程中常见问题

1.4 研究目的及意义

第2章 外植体最佳取材时期的研究

2.1 引言

2.2 试验材料、仪器和试剂

2.3 试验方法

2.4 结果与分析

2.5 讨论

第3章 不同激素对牡丹试管苗增殖的影响

3.1 引言

3.2 试验材料、仪器和试剂

3.3 试验方法

3.4 结果与分析

3.5 讨论

第4章 AgNO3抑制牡丹试管苗褐化机理的研究

4.1 引言

4.2 试验材料、仪器

4.3 测定方法

4.4 结果与分析

4.5 讨论

第5章 不同因素对牡丹试管苗生根的影响

5.1 引言

5.2 试验材料、仪器与试剂

5.3 试验方法

5.4 结果与分析

5.5 讨论

参考文献

附录 试验照片

致谢

攻读硕士学位期间的研究成果