PDN大鼠实验动物模型建立与GBP对其皮肤痛敏和脊髓Glu含量及下丘脑和背根神经节JNK表达的影响

摘要

糖尿病神经痛（PDN）是常见的糖尿病并发症之一，PDN大鼠可因慢性疼痛而活动减少，出现睡眠障碍和抑郁症状，常规的止痛药对它常无明显疗效。加巴喷丁（GBP）即1-氨甲基-环己烷乙酸，是一种新型抗癫痫药，是国家食品药品管理局正式批准的治疗神经病理性疼痛的一线用药。本研究拟先造模 PDN大鼠，通过测定 PDN大鼠皮肤机械痛敏及检测脊髓 Glu含量和下丘脑、脊髓背根神经节JNK和P-JNK的表达，研究GBP对PDN大鼠的作用机制，为进一步探讨GBP在PDN治疗方面的推广应用提供实验依据和理论基础。
　　该研究从河南省实验动物中心购买 SD大鼠，建立了链脲佐菌素（STZ） PDN大鼠实验动物模型，进而利用该实验动物模型，将动物随机分为 PDN对照组和 GBP实验组。对照组大鼠腹腔注射等量柠檬酸缓冲液， GBP实验组给予GBP干预，实验期间隔天测定机械痛阈一次。实验结束后采用 OPA柱前衍生高效液相色谱法测定大鼠 L5-DRG，L6-DRG和脊髓组织及脊髓微透析液中 Glu含量；用免疫组化SP法观察大鼠下丘脑JNK的表达变化；免疫荧光标记法观察各组大鼠L5-DRG，L6-DRG和 S1-DRG神经元JNK和p-JNK的表达变化。实验观察期内 PDN大鼠皮肤机械痛觉阈值呈现进行性下降，GBP组痛觉阈值稳中有升，但不能恢复至正常水平，与 PDN组比较，差异显著(P<0.05)。Glu含量在各实验组大鼠 L5-DRG，L6-DRG、脊髓组织和脊髓微透析液中有所差异，GBP组大鼠脊髓组织和脊髓微透析液中 Glu含量较低，与 PDN组相比差异极显著(P<0.01)；L5-DRG，L6-DRG中Glu含量高于PDN组(P<0.05)。JNK免疫反应阳性产物在各实验组大鼠下丘脑视上核和室周核及弓状核均有分布，JNK在 PDN组大鼠下丘脑视上核和室周核及弓状核的表达量显著高于 GBP组(P<0.05)，与对照组相比表达量也明显增高(P<0.01)。L5-DRG，L6-DRG和 S1-DRG内JNK和 p-JNK标记阳性神经元大多为中小型细胞，阳性标记主要位于胞浆内，分别呈深红色和深绿色，PDN组JNK和p-JNK标记阳性神经元的数量明显多于GBP组，二者比较差异显著(P<0.05)。本实验研究结果表明，加巴喷丁具有减轻糖尿病性神经痛大鼠皮肤机械痛敏的作用，其作用机制可能与抑制脊髓兴奋性氨基酸神经递质的释放和下丘脑JNK及初级感觉神经元JNK和p-JNK的表达密切相关，GBP通过阻断或抑制 JNK/SAPK通路活化可以起到缓解糖尿病性神经痛作用。

目录

声明

第1章 文献综述

1.1 加巴喷丁概述

1.1.1 加巴喷丁的性质及作用机理

1.1.2 加巴喷丁临床应用研究进展

1.2 糖尿病概述

1.2.1 糖尿病的发病原理及症状

1.2.2 糖尿病神经痛

1.3 Glu和JNK及P-JNK与PDN

1.4 本论文研究的目的和意义

第2章 实验研究

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 主要仪器

2.1.3 主要实剂

2.2 实验方法

2.2.1 实验动物模型的建立

2.2.2 实验动物的分组与处理

2.2.3 机械缩足反射阈值测定

2.2.4 微透析样品处理

2.2.5 Glu含量测定

2.2.6 免疫组织化学法检测下丘脑JNK的表达

2.2.7 免疫荧光标记染色

第3章 结果与分析

3.1 糖尿病神经痛大鼠模型的确认

3.2 GBP对PDN大鼠皮肤机械痛敏的影响

3.3 GBP对PDN大鼠DRG、脊髓组织和脊髓微透析液中Glu含量的影响

3.4 加巴喷丁对糖尿病神经痛大鼠下丘脑JNK表达的影响

3.5 GBP对PDN大鼠背根神经节神经元JNK以及p-JNK表达的影响

3.6 分析与讨论

3.6.1 GBP对PDN大鼠皮肤机械痛敏的影响

3.6.2 GBP对PDN大鼠脊髓Glu含量和下丘脑JNK表达的影响

3.6.3 GBP对PDN大鼠DRG神经元JNK和P-JNK表达的影响

第4章 结论

参考文献

致谢