KLF-4、CD44在食管鳞癌中的表达及意义

摘要

目的：检测真核生物转录因子KLF-4及细胞粘附分子CD44在食管鳞癌中的表达水平，研究其与食管鳞癌临床病理特征和预后的关系，阐明KLF-4和CD44在食管鳞癌中表达的相关性。
　　方法:收取50例食管鳞癌组织和50例食管癌旁组织标本，应用免疫组织化学法、Western blot及Real-time PCR法检测KLF-4和CD44的表达水平；分析CD44和KLF-4表达与食管鳞癌患者预后及该病病理特征间的联系；进一步统计学分析KLF-4和CD44在食管癌组织表达的相关性。统计分析采用SPSS18.0进行，且当P<0.05，数据比较差异显著。
　　结果：1.免疫组化结果显示：KLF-4蛋白定位于细胞胞浆，呈棕黄色颗粒， KLF-4在食管鳞癌组织中的阳性率（32.0％），显著低于癌旁食管组织（74.0%）；KLF-4的低表达与食管鳞癌的淋巴结转移有关（P<0.05），与患者性别、年龄、肿瘤分化和浸润程度无明显相关（P>0.05）。CD44蛋白定位于细胞包膜，呈棕黄色颗粒， CD44在食管鳞癌组织中的阳性率（88.0%），显著高于癌旁食管组织（10.0%），CD44的高表达与肿瘤分化程度、浸润程度及TNM分期有关（P<0.05），与患者性别、年龄、肿瘤淋巴结转移无显著相关（P>0.05）。进一步对免疫组化结果进行相关性分析，显示在食管癌组织中KLF-4的表达与CD44的表达呈负相关（P<0.05）。
　　对所有食管癌患者进行随访，并采用Kaplan-Meier法对单因素作生存分析，结果表明：KLF-4阳性患者、KLF-4阴性患者、CD44阳性患者以及CD44阴性患者的中位生存期分别为28.0个月、13.0个月、12.0个月、24.0个月，且两组间的Log-rank比较差异显著（P<0.05），揭示KLF-4、CD44是影响食管鳞癌患者预后的重要因素。
　　2.Real-time PCR结果显示：KLF-4在癌旁食管组织中表达显著高于癌组织(P<0.05)。而 CD44在食管癌组织中表达显著高于癌旁食管组织(P<0.05)。进一步，在不同分化程度的食管癌细胞系(ESC)中检测KLF-4 mRNA和CD44 mRNA水平，结果显示KLF-4 mRNA在中分化的ESC( KYSE140)的表达显著高于低分化ESC中(KYSE70)，CD44 mRNA在低分化ESC中(KYSE70)的表达显著高于高、中分化的ESC(KYSE450，KYSE140)；进一步对Real-timePCR结果进行相关性分析，显示在食管癌组织中KLF-4的表达与CD44的表达呈负相关(P<0.05）。
　　3. Western blot结果进一步验证前期结果：和对应食管鳞癌组织对照，KLF-4蛋白在癌旁组织中表达显著升高；而同相应癌旁食管组织相比，CD44蛋白在食管鳞癌组织中的表达显著升高，且两组间比较差异显著（P<0.05）。
　　结论：KLF-4在食管鳞癌中的表达降低，而CD44在食管鳞癌中的表达升高，两者表达具有相关性；KLF-4与CD44的联合检测对预测食管鳞癌的恶性程度及预后有一定的指导意义。

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第1章 绪论

1.1 研究背景

1.1.1 流行病学

1.1.2 食管癌分子通路

1.1.3 肿瘤干细胞在肿瘤发生发展、治疗中的作用

1.1.4 肿瘤干细胞及分子标记与食管癌的关系

1.1.5 KLF-4的概述

1.1.6 CD44的概述

1.2 研究目的

1.3 研究意义

第2章 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 主要试剂

2.1.2 主要仪器实验仪器

2.1.3 标本处理

2.2 实验方法

2.2.1 免疫组化实验步骤

2.2.2 Realtime-PCR实验步骤：

2.2.3Western blot实验步骤

2.2.4 细胞培养

2.3 统计学方法

第3章 结果

3.1 免疫组化结果

3.1.2 KLF-4在食管鳞癌和食管癌旁组织中的表达

3.1.2 KLF-4在食管鳞癌组织中的表达及与临床病理指标之间的关系

3.1.3 CD44在食管鳞癌和食管癌旁组织中的表达

3.1.4 CD44在食管鳞癌组织中的表达及与临床病理指标之间的关系

3.1.5 KLF-4与CD44在食管鳞癌组织中的表达与预后之间的关系

3.1.6 KLF-4与CD44在食管鳞癌组织中表达的相关性

3.2 食管鳞癌组织Realtime-PCR结果

3.2.1 KLF-4及CD44在食管鳞癌及癌旁组织中mRNA的表达

3.2.2 KLF-4与CD44在不同分化程度食管鳞癌细胞系的mRNA表达

3.2.3 KLF-4与CD44在食管鳞癌组织中表达的相关性

3.3Western blot结果

第4章 讨论

4.1 KLF-4在食管鳞癌中的作用

4.1.1 KLF-4在食管癌组织中的表达降低及其可能机制

4.1.2 KLF-4蛋白与食管癌临床病理因素和预后的关系

4.1.3 KLF-4下调对食管癌生长的影响

4.2 CD44与食管鳞癌的关系

4.2.1 CD44在食管癌组织中的表达升高及其可能机制

4.2.2 CD44蛋白与食管癌临床病理因素和预后的关系

4.2.3 CD44上调对食管癌生长的影响

4.3 KLF-4与CD44在食管鳞癌中的关系

第5章 结论

参考文献

致谢

攻读学位期间的研究成果