中国部分桂花栽培品种遗传多样性和亲缘关系的AFLP分析

摘要

桂花(Osmanthus fragrans Lour.)，是木犀科(Oleaceae)木犀属(Osmanthus)植物，是我国的十大传统名花之一。桂花原产于我国，经过长期的自然选择和人工选育，形成了众多的栽培品种，种质资源十分丰富。目前，对桂花品种的分类大多是根据形态特征将其分为四个品种群：四季桂品种群(Asiatieus Group)、银桂品种群(Albus Group)、金桂品种群(Luteus Group)和丹桂品种群(AtLrantiacus Group)。而有关利用AFLP技术对桂花品种资源进行分类研究的报道还较少。 本文利用AFLP-银染技术，UPGMA聚类分析方法，从基因组DNA扩增多态性的角度，进行了两组探索：1)湖北省部分桂花品种遗传多样性和亲缘关系研究；2)采自湖北、浙江和广西的42个桂花品种间的遗传多样性和亲缘关系研究，旨在从基因组水平上为桂花品种分类提供科学依据，丰富桂花植物系统学研究的内容，为保护我国桂花种质资源的多样性，进行桂花新品种选育提供理论依据。主要的研究结果如下： 1.通过试验改进了桂花基因组DNA盼提取纯化方法，获得了高质量的DNA，建立了适用于桂花品种分类的AFLP反应体系，得到了清晰的指纹图谱。 2.选取湖北省25个桂花品种用于本次AFLP分析。从26对引物组合中筛选出7对用于扩增，并对扩增图谱进行统计分析。7对引物组合共产生342个位点，其中207个为多态性位点，占60.52％，根据AFLP扩增结果，应用NTSYS软件进行Nei氏遗传距离计算，然后以Nei氏遗传距离矩阵按UPGMA法构建树状聚类图。通过聚类分析把25个桂花品种分为6个类群，与传统的形态学分类结果不完全一致。聚类结果表明：25个桂花品种间遗传变异较大；金桂品种群和丹桂品种群间关系较近，银桂品种群中有部分品种与金桂品种群和丹桂品种群亲缘关系较远。 3.对来自湖北、浙江和广西的42个桂花品种间的亲缘关系和遗传多样性进行了AFLP分析。筛选出10对引物组合用于扩增，共检测出了436个位点，其中269个为多态性位点，占61.70％，结果表明：桂花品种之间存在着较为丰富的遗传多样性。用UPGMA法对AFLP结果进行聚类分析显示：来源相同的同色桂花品种间的亲缘关系相对较近，桂花的来源地与聚类结果有一定的关系，广西桂花品种存在明显的区域性，其与湖北和浙江的桂花品种间亲缘关系较远。

目录

文摘

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论文说明:英文缩写

声明

1 前言

1.1桂花简介

1.2桂花的生物学特性

1.3桂花品种分类研究概况

1.3.1国外桂花品种分类研究概况

1.3.2国内桂花品种分类研究概况

1.4桂花品种遗传多样性和亲缘关系的研究方法及其主要进展

1.4.1形态学水平

1.4.2细胞学水平

1.4.3生理生化水平

1.4.4分子水平

1.4.5桂花数量分类方法研究

1.5桂花品种分类研究中存在的不足

1.6研究目的和意义

2材料与方法

2.1材料

2.1.1供试材料

2.1.2主要试剂

2.1.3主要仪器设备

2.2实验方法

2.2.1桂花DNA的提取、纯化和含量的检测

2.3 AFLP实验过程

2.3.1桂花基因组DNA的提取

2.3.2模板DNA的限制性内切酶酶切

2.3.3接头复性

2.3.4接头的连接

2.3.5 DNA片段的预扩增反应

2.3.6 DNA片段的选择性扩增反应

2.3.7凝胶的制备及电泳

2.3.8银染

2.4数据统计及分析方法

3 结果与分析

3.1提取DNA的质量

3.2引物的筛选

3.3供试材料的AFLP分析

3.3.1湖北省部分桂花品种的AFLP分析

3.3.2湖北、浙江和广西部分桂花品种的AFLP分析

4讨论

4.1有关AFLP分析体系的各个技术环节

4.1.1桂花总DNA的提取

4.1.2基因组DNA的酶切与连接

4.1.3限制性片段的扩增

4.1.4变性聚丙烯酰胺凝胶检测

4.1.5关于银染分析

4.2桂花品种遗传多样性及亲缘关系的探讨

4.2.1桂花品种的分类

4.2.2基于AFLP标记的湖北部分桂花品种的遗传多样性及亲缘关系探讨

4.2.3基于AFLP标记的中国部分桂花品种的遗传多样性及亲缘关系探讨

4.3 AFLP分子标记在桂花遗传多样性研究中的应用探讨

4.4形态标记与分子标记在植物遗传多样性研究中的比较分析

5 结论

参考文献

致谢

附注：已发表论文