天阳丸对晚期糖尿病肾病模型大鼠的药效学研究

摘要

目的:
　　观察自立温肾阳之方天阳丸对晚期糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，DN)模型大鼠的空腹血糖、糖化血红蛋白、肌酐、尿素氮、尿蛋白及其肾脏病理变化的影响，探讨其药效学作用。基于“方证相应”的理念，与自立益肾阴之方地子丸对照研究，以期为DN晚期阶段中医学之阴阳属性提供探索性参佐。
　　方法:
　　雄性SD大鼠60只，将大鼠随机分为空白组和造模组，空白组用普通饲料喂养，其余各组均用高脂乳喂养10周后联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(Streptozocin，STZ)，测量空腹血糖值大于16.7mmol/L，确定为糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)模型。根据空腹血糖值将造模组大鼠分为模型组、阳性药组、地子丸组、天阳丸组。6周后，使用代谢笼收集大鼠24小时尿液，测量大鼠尿微量白蛋白在30-300mg/24h之间，认为DN模型复制成功。此时，阳性药组、地子丸组及天阳组分别给予相应药物经口灌胃干预，持续给药8周。实验期间自由饮水，不使用胰岛素和其它降糖药。实验结束后收集大鼠24小时尿液，用以测量大鼠的24小时尿蛋白。行腹主动脉穿刺取血，采用酶联免疫吸附法（Enzyme-linkedimm imosorbent assay，ELISA）分别检测各组大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白、尿蛋白、肌酐和尿素氮等指标。各组大鼠处死后，将肾脏以4％多聚甲醛溶液固定，采用HE染色方法，观察各组大鼠肾脏的病理变化情况，其余肾组织储存于液氮中备用。
　　结果
　　1.对DN大鼠一般情况的影响:与空白组相比，模型组大鼠出现活动度减少，反应迟钝，精神萎靡，体重逐渐下降，皮毛枯槁无光泽，弓背耸毛，骨骼凸出等症状。阳性药组、地子丸组的大鼠整体状态整体优于模型组，天阳丸组大鼠与其他药物治疗组大鼠相比一般情况最佳。
　　2.对各组大鼠肾脏指数的影响:与空白组相比，模型组大鼠的肾脏指数升高明显;与模型组比较，天阳丸组、阳性药组、地子丸组的DN大鼠肾脏指数均有所降低，且天阳丸组大鼠肾脏指数降低明显，差异具有统计学意义。
　　3.对各组大鼠空腹血糖的影响:与空白组相比，其余各组大鼠的空腹血糖值均明显升高;与模型组相比较，各药物治疗组空腹血糖值均降低，其中天阳丸组空腹血糖值最低，与阳性药组及地子丸组相比较，差异均具有统计学意义。
　　4.对各组DN大鼠糖化血红蛋白含量的影响:与空白组相比，其余各组大鼠的大鼠糖化血红蛋白含量均明显升高，差异具有统计学意义;与模型组相比较，各药物治疗组的糖化血红蛋白含量比较无统计学意义。
　　5.对各组DN大鼠空腹胰岛素水平的影响:与空白组相比，其余各组大鼠的空腹胰岛素水平均明显升高，差异具有统计学意义;与模型组相比较，阳性药组、地子丸组及天阳丸组空腹胰岛素水平均降低，差异具有统计学意义。
　　6.对各组大鼠肌酐和尿素氮水平的影响:与空白组相比，其余各组大鼠的肌酐与尿素氨水平均明显升高;与模型组比较，阳性药组、天阳丸组大鼠肌酐与尿素氮水平均显著降低;与地子丸组比较，天阳丸组、阳性药组大鼠肌酐与尿素氮水平均降低，且天阳丸组大鼠肌酐与尿素氮的含量最低，差异均具有统计学意义。
　　7.对各组大鼠尿蛋白含量的影响:与空白组相比，其余各组大鼠尿蛋白含量均明显升高;与模型组相比，各药物治疗组的尿蛋白含量均降低;与地子丸组相比，天阳丸组与阳性药组大鼠尿蛋白含量降低较为显著，且阳性药组大鼠尿蛋白含量最低，差异均具有统计学意义。
　　8.对各组大鼠肾脏组织病理学变化:HE染色后光镜下观察，模型组可见肾脏体积增大，肾小球径增大，部分肾小球系膜区增宽，系膜基质轻度结节样增生，肾小管扩张明显。经过药物治疗后，各组大鼠的肾脏病理变化与模型组相比明显减轻。其中，天阳丸组大鼠的肾小球及肾小管与空白组相比略显增大，而阳性药组与地子丸组大鼠的肾小球体积相差不明显。
　　结论:
　　1.天阳丸能够改善晚期DN模型大鼠的一般状态，降低相关的药效学指标，并有效的减少尿蛋白的排泄量、降低肾脏肥大指数，减轻肾小球的硬化程度，修复肾脏功能，对肾脏有一定的保护作用。
　　2.基于“以方测证”的理念，将天阳丸与地子丸进行比较，冀以为DN发展至晚期多伴有阴阳两虚之证提供现代实验研究探索数据参佐。

目录

缩略词表

摘要

引言

文献综述

1 糖尿病肾病中医研究

1．1 有关病名

1．2 发病机理

1．3 中医药治疗

2 糖尿病肾病的相关研究

2．1 发病机制的研究进展

2．2 近期西医关于糖尿病肾病的情况治疗

实验研究

1 实验材料

1．1 实验动物

1．2 实验药品

1．3 实验仪器

1．4 实验试剂的配置

2．1 动物的分组及模型建立

2．2 中药复方给药方法

2．3 样本的采集

2．4 指标检测及方法

3 统计学方法

实验结果

1 实验后大鼠的一般状态

2 对大鼠肾脏肥大指数(KI)的影响

3 各组大鼠空腹血糖(FBG)比较

4 各组大鼠糖化血红蛋白(HbA1c)含量比较

4 空腹胰岛索(INS)水平

5 各组大鼠血清中肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)的含量比较

6 各组大鼠尿蛋白(PRO)比较

7 各组大鼠肾脏组织病理学变化

讨论

1．2 自发性诱导DN动物模型

1．3 基因工程DN动物模型

2 阳性药物的选择

3 方证相应性研究

4 天阳丸的立法原则

4．1 天阳丸的组成及分析

4．2 现代药理研究

5 天阳丸对晚期DN大鼠药效学指标变化的影响

5．1 对DN大鼠相对肾重的影响

5．2 对大鼠血糖和糖化血红蛋白的影响

5．3 对大鼠空腹胰岛素水平的影响

5．4 对大鼠24h蛋白尿排泄量的影响

5．5 对DN大鼠血肌酐、尿素氮的影响

5．6 对肾脏病理形态的影响

6 问题与展望

结论

参考文献

致谢

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