地黄标准物质及熟地黄质量评价标准的研究

摘要

熟地黄，味甘，性微温;归肝，肾经;能够补血滋阴，益精填髓;可用于治疗血虚，精血不足和肝肾阴虚等病症。在临床被广泛应用。2010版《中华人民共和国药典》一部，收载的中药成方制剂和单味制剂中，有近1/10都涉及到熟地黄。
　　熟地黄是由玄参科植物地黄(Rehmannia glutinosa Libosch.)的新鲜或干燥块根，经过蒸制或酒炖而成。《本草经集注》和《雷公炮炙论》最早记载了熟地黄的蒸制和酒炖方法。熟地黄的炮制要求“九蒸九（曝）乃至”，“光黑如漆，味甘如饴”。在此过程中，地黄的性味由甘寒转为了甘温，虽都归肝、肾经，但功效由清热生津、凉血、止血，转为了补血养阴、填精益髓。成为养血补虚之要药。
　　熟地黄中含有苷类、糖类、氨基酸类、金属离子等多种化学成分。目前多认为环烯醚萜苷类是地黄类药材发挥临床疗效的主要有效成分。最新研究发现，环烯醚萜苷类的地黄苷A、地黄苷D，相对于地黄类药材中的其他有效成分较稳定，可作为地黄类药材特别是熟地黄质量控制的指标性成分。
　　研究从地黄类药材的主要有效成分环烯醚萜苷类的提取入手:将鲜地黄低温破碎提取，依次利用大孔树脂色谱柱、硅胶H色谱柱、葡聚糖凝胶色谱柱、高效液相制备色谱柱等多种现代色谱层析技术进行柱层析分离，纯化精制，从地黄中得到四种环烯醚萜苷类标准物质。经高效液相色谱检测，四种物质纯度均达到98％以上。经光谱分析鉴定结构，文献对照，确定这四种物质分别为:梓醇、益母草苷、地黄苷A、地黄苷D。
　　在得到地黄类药材标准物质的基础上，进一步对梓醇、地黄苷A、地黄苷D等三种标准物质在不同环境下的稳定性做深入研究。采用高效液相色谱法，分别测定梓醇、地黄苷A、地黄苷D在不同环境下的高效液相色谱图，通过比较其色谱峰的变化，研究其在不同环境下的稳定性。发现，紫外光线对梓醇、地黄苷A、地黄苷D稳定性的影响最大，其次是酸、碱、氧化剂，此外，还原剂、高温、Na+、Cu2+、Fe3+、Ag+、Ca+等金属离子对梓醇也有一定影响。并指出，在临床应用地黄类药材时应尽量避免接触能引起其有效成分降解的环境，以便发挥更好的药效。
　　在地黄类药材标准物质研究基础上，建立了熟地黄质量评价标准方法。采用薄层色谱(TLC)法对不同产地样品中地黄苷A、地黄苷D、毛蕊花糖苷进行定性鉴别;采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法同时测定不同样品中三种有效成分的含量。结果:TLC分离度好，专属性强;RP-HPLC含量测定，地黄苷A在0.296～1.776μg范围内线性关系良好，Y=1.99916*10-6 x-0.0267363(r=0.9997);地黄苷D在0.684～3.42μg范围内线性关系良好，Y=2.65844*10-6 x-0.0456232(r=0.9996);毛蕊花糖苷在0.0816～0.408μg范围内线性关系良好，Y=5.28041*10-6 x-0.0229814(r=0.9998)。结论:所建方法综合、全面、快速、简便、准确，可作为怀药熟地黄质量控制有效方法。
　　分析提取地黄类药材中的地黄苷类有效成分、研究其稳定性，并建立熟地黄质量控制标准。为科学、有效的利用地黄类中药材提供依据，同时为进一步深入研究开发、应用含地黄类中成药奠定良好基础。

目录

声明

摘要

引言

1 文献综述

1．1 熟地黄的渊源及炮制方法

1．2 熟地黄中有效成分的研究进展

1．2．1 苷类

1．2．2 5-羟甲基糠醛

1．2．3 微量元素

1．2．4 糖

1．3 同时测定地黄类药材中多个有效成分

1．4 熟地黄质量控制

1．5 讨论

2 地黄标准物质的提取分离

2．1 实验材料

2．1．1 实试验仪器

2．1．2 样品来源

2．2 对照品的制备

2．2．1 药材的提取

2．2．2 粗分离

2．2．3 细分离

2．2．4 精制纯化

2．3 结果

2．3．1 HPLC检测

2．3．2 结构鉴定

2．4 讨论

3 地黄中三种标准物质稳定性研究

3．1 实验材料

3．1．1 实试验仪器

3．1．2 对照品来源

3．2 实验方法的研究

3．2．1 色谱条件的选定

3．2．2 对照品溶液的制备

3．2．3 测定方法

3．2．4 测定方法验证

3．3 实验方法与结果

3．3．1 不同pH值的影响

3．3．2 紫外光的影响

3．3．3 不同金属离子对梓醇的影响

3．3．4 氧化剂的影响

3．3．5 还原剂的影响

3．3．6 温度对梓醇的影响

3．4 讨论

4 熟地黄质量评价标准的研究

4．1 实验材料

4．1．1 实试验仪器

4．1．2 样品来源

4．3 定性鉴别

4．3．1 对照品溶液的制备

4．3．2 供试品溶液的制备

4．3．3 层析条件的选择

4．4 含量测定方法的研究

4．4．1 色谱条件的选定

4．4．2 对照品溶液的制备

4．4．3 供试品溶液的制备

4．4．4 含量测定方法

4．4．5 线性关系考察

4．4．6 精密度实验

4．4．7 稳定性实验

4．4．8 重复性实验

4．4．9 加样回收率实验

4．5 不同产区怀药熟地黄中地黄苷A、地黄苷D、毛蕊花糖苷的HPLC含量测定结果

4．6 讨论

4．6．1 样品提取溶媒的选择

4．6．2 样品提取方法的选择

4．6．3 检测波长的选择

4．6．4 同时测定五种标准物质

4．6．5 标准物质的含量

结论

参考文献

附录

致谢