黄芪甲苷对PC12细胞OGD/R损伤的保护作用及其作用机制研究

摘要

目的：探究黄芪甲苷对Na2S204诱导的PC12细胞（大鼠嗜铬细胞瘤细胞，pheochromocytoma cell）OGD/R损伤的保护作用及其相关的保护作用机制。
　　方法：采用含有不同浓度的Na2S204（10、8、6、4、2mmol/L）的Earles溶液对PC12细胞进行缺氧缺糖损伤，并用 CCK-8实验方法筛选出最佳损伤浓度；应用尼莫地平为阳性药，并在Na2S204的最佳损伤浓度条件下，加入不同浓度的尼莫地平（25、5、1μmol/L）进行预保护，采用CCK-8方法筛选出阳性药最佳浓度；应用CCK-8实验测定黄芪甲苷对PC12细胞的增殖影响；应用显微镜观察黄芪甲苷预保护后各组细胞形态学差异；采用CCK-8方法测定不同浓度黄芪甲苷预保护后各组细胞的存活率；LDH试剂盒法测定各组细胞的LDH漏出量；Hoechst33342/PI染色法检测各组细胞凋亡与坏死情况；加入罗丹明123通过荧光分光光度计法测定各组的膜电位；试剂盒法测定不同浓度黄芪甲苷预保护后各组细胞SOD、MDA、GSH、ROS的含量；采用western blot测定加入PI3K/Akt通道抑制剂LY294002前后各组细胞Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达量，并用CCK-8实验测定加入抑制剂LY294002后各组细胞的存活率。
　　结果：通过CCK-8实验显示，Na2S204浓度为10mmol/L时，对PC12细胞缺血/再灌注损伤的细胞存活率在50％左右，与空白组相比具有极显著性差异（P<0.01），在此种损伤条件下，尼莫地平浓度为5μmol/L时保护作用最强；CCK-8实验结果显示，黄芪甲苷预保护后能够提高OGD/R损伤时细胞的存活率，且具有一定的浓度梯度差异；Hoechst33342/PI染色实验中结果显示，随着黄芪甲苷浓度的升高荧光强度逐渐降低；LDH试剂盒实验显示，黄芪甲苷预保护后加药组LDH的含量随药物浓度的升高而降低；在线粒体膜电位的测定实验中，黄芪甲苷能够升高OGD/R损伤时细胞的膜电位；抗氧化试剂盒结果显示，黄芪甲苷预保护后能够提高OGD/R损伤时细胞SOD、GSH的含量，降低MDA、ROS的含量；通过western blot实验结果显示，在加入PI3K/Akt抑制剂LY294002前，加药组p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达量均随药物浓度升高而升高，Bax、Caspase-3蛋白表达量随药物浓度升高而降低；加入抑制剂后，加药组p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达量均降低，Bax与Caspase-3蛋白表达量相对提高。
　　结论：黄芪甲苷在PC12细胞OGD/R损伤时能够提高细胞的存活率以及线粒体膜电位，降低LDH的漏出量，能够通过增加SOD、GSH含量并降低MDA、ROS的含量从而减弱细胞氧化应激损伤的能力，并能够通过增加p-Akt/Akt的蛋白含量，进而增加Bcl-2的蛋白表达，降低Bax、Caspase-3的蛋白表达，因此，黄芪甲苷对PC12细胞OGD/R损伤具有保护作用，并且其保护作用机制与抑制氧化应激损伤以及PI3K/Akt/Bcl-2信号通路密切相关。

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前言

参考文献

第一部分 细胞培养与OGD/R模型建立

1 实验材料

2 方法

3统计学处理

4 实验结果

5 结论

6 讨论

第二部分 黄芪甲苷对PC12细胞OGD/R损伤的保护作用

1 材料

2 方法

3 统计学处理

4 实验结果

5 结论

6 讨论

第三部分 黄芪甲苷对PC12细胞OGD/R所致氧化应激损伤的作用机制研究

1 材料

2 方法

3 统计学处理

4 实验结果

5 结论

6 讨论

第四部分 黄芪甲苷基于PI3K/Akt/Bcl-2信号途径对PC12细胞OGD/R损伤的保护机制研究

1 材料

2 方法

3 统计学处理

4 实验结果

5 结论

6 讨论

参考文献

附录

致谢