黄芩素-黄芩苷复合物诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及机制

摘要

宫颈癌是危害世界女性健康的重大恶性肿瘤之一，近年来其发病率逐年上升，且发病人群趋于低龄化，中草药在抗宫颈癌中优势逐渐显现，使其备受关注。黄芩是中草药中的常用药，包含多种抗肿瘤活性的化合物，黄芩素、黄芩苷为其重要组成成分，对多种恶性肿瘤有良好的抑制作用，但黄芩素-黄芩苷配伍复合物对宫颈癌的作用尚未见有深入的研究，所以本研究对黄芩素-黄芩苷复合物抗宫颈癌的作用及机制进行探索。
　　本研究将黄芩素和黄芩苷按照特定比例配伍成复合物，研究黄芩素和黄芩苷联合作用时对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及机制。体外培养HeLa细胞，黄芩素-黄芩苷复合物处理后，采用MTT法研究复合物对HeLa细胞增殖的影响，并筛选二者的最佳浓度配伍，进而利用等效线图解分析法判断黄芩素和黄芩苷抗癌作用的关系；光镜下观察HeLa细胞凋亡的形态；Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率；Western Blot测定凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Fas、FasL的表达，分光光度法检测HeLa细胞中Caspase-8、9、3活性。以死亡受体介导的细胞外凋亡途径、线粒体介导的细胞内凋亡途径为研究线索，初步探讨黄芩素-黄芩苷复合物诱导HeLa细胞凋亡的作用及机制。
　　本研究表明，黄芩素和黄芩苷对HeLa细胞的抑制作用呈协同关系，两者按照质量比1:2配伍成复合物时对HeLa细胞抑制作用较为明显，且具有时间-剂量依赖性。黄芩素-黄芩苷复合物可以有效诱导HeLa细胞凋亡，其作用机制可能是降低HeLa细胞抗凋亡基因Bcl-2的表达，升高促凋亡基因Bax的表达，并增强死亡受体Fas和配体FasL的蛋白表达，从而激活Caspase酶家族，引发级联反应，最终诱导HeLa细胞凋亡。本研究为黄芩素-黄芩苷复合物抗宫颈癌的科学研究提供理论依据，在配伍中药成分抗宫颈癌方面提供了思路。

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第1章 绪 论

1.1 课题的研究背景及意义

1.2 宫颈癌研究现状

1.3 黄芩抗肿瘤的研究

1.4 课题的主要研究内容

第2章 宫颈癌HeLa细胞的体外培养

2.1 引言

2.2 试验材料

2.3 细胞复苏

2.4 细胞冻存

2.5 细胞传代

2.6 讨论

2.7 本章小结

第3章 黄芩素-黄芩苷复合物抑制HeLa细胞增殖作用的研究

3.1 引言

3.2 试验材料

3.3 试验方法

3.4 试验结果

3.5 讨论

3.6 本章小结

第4章 黄芩素-黄芩苷复合物诱导HeLa细胞凋亡作用的研究

4.1 引言

4.2 试验材料

4.3试验方法

4.4 试验结果

4.5 讨论

4.6 本章小结

第5章 黄芩素-黄芩苷复合物诱导HeLa细胞凋亡机制的研究

5.1 引言

5.2 试验材料

5.3试验方法

5.4试验结果

5.5 讨论

5.6 本章小结

结论

参考文献

攻读硕士学位期间承担的科研任务与主要成果

致谢