肝复康胶囊对四氯化碳及氨基半乳糖所致肝损伤的实验研究

摘要

本实验的目的是探讨肝复康胶囊对四氯化碳及氨基半乳糖所致肝损伤的保护作用，以及对急性肝损伤可能的保护机制。 研究方法： 1.肝复康胶囊对CCl4所致肝损伤的实验研究。取昆明种小鼠60只，雌雄各半，体重18～22g，采用随机抽样的方法，分成六组，每组10只，即空白对照组(A组)，肝损伤模型组(B组)，阳性对照药联苯双酯组(C组)，肝复康胶囊三个剂量组：小剂量组(D组)，中剂量组(E组)，大剂量组(F组)。以上各组均灌胃给药，A，B组：给以生理盐水，C组：联苯双酯200mg/kg.d，D组：肝复康0.9g/kg.d，E组：肝复康1.8g/kg.d，F组：肝复康3.6g/kg.d，一天一次，连续7天，于末次给药后1小时，除空白对照组外，其余各组均腹腔注射0.1％四氯化碳(CCl4)10ml/kg，空白对照组腹腔注射等量豆油。24小时后测定各项指标，测定各项指标前自由饮水，禁食12小时。①摘取眼球取血，赖氏法测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。②每只小鼠取肝左叶部位大致相同的一小块肝组织约0.5cm3，固定于Bone氏液中，制成石蜡切片，HE染色，作病理切片检查。病理评估方法：(一)正常肝细胞。(+)肝细胞变性呈点状坏死。(++)肝细胞变性呈灶性坏死，或病变的肝细胞小于肝小叶的1/3。(+++)肝小叶1/3～2/3肝细胞坏死。(++++)肝小叶超过2/3的肝细胞坏死。③取肝右叶组织块，于冰冷的PBS液冲洗后称重，4℃下用匀浆器研磨成10％组织匀浆，于4000r/min离心10min，取上清液，检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。所有结果均采用Excel软件提供的两组间t检验和方差分析方法，对数据进行处理，等级资料用秩和检验。 2.肝复康胶囊对D-GalN所致肝损伤的实验研究。取昆明种小鼠60只，雌雄各半，体重18～22g，采用随机抽样的方法，分成六组，每组10只，即空白对照组(A组)，肝损伤模型组(B组)，阳性对照药联苯双酯组(C组)，肝复康胶囊三个剂量组：小剂量组(D组)，中剂量组(E组)，大剂量组(F组)。以上各组均灌胃给药，A，B组：给以生理盐水，C组：联苯双酯200mg/kg.d，D组：肝复康0.9g/kg.d，E组：肝复康1.8g/kg.d，F组：肝复康3.6g/kg.d一天一次，连续7天，于末次给药后1小时，除空白对照组外，其余各组均给予10％D-氨基半乳糖(生理盐水配制)，按照800mg/kg腹腔注射，空白对照组腹腔注射等量生理盐水，24小时后测定各项指标，测定各项指标前禁食12小时，自由饮水。①摘取眼球取血，赖氏法测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)。②每只小鼠取肝左叶部位大致相同的一小块肝组织约0.5cm3，固定于Bone氏液中，制成石蜡切片，HE染色，作病理切片检查。病理评估方法：(一)正常肝细胞。(+)肝细胞变性呈点状坏死。(++)肝细胞变性呈灶性坏死，或病变的肝细胞小于肝小叶的1/3。(+++)肝小叶1/3～2/3肝细胞坏死。(++++)肝小叶超过2/3的肝细胞坏死。采用Excel软件提供的两组间t检验和方差分析方法，对数据进行处理。 研究结果： 1.肝复康胶囊对CCl4所致肝损伤小鼠肝功能的影响。 1.1.对ALT活性的影响：模型组小鼠ALT含量(250.6±29.9U)显著高于正常空白组(39.2±8.26U)(P＜0.01)，提示肝损伤模型复制成功。肝复康胶囊0.9g/kg、1.8g/kg和3.6g/kg能明显降低CCl4损伤小鼠血清ALT活性，分别为：142±12.7U、121.4±13U和105.5±11U，显著低于模型对照组(P＜0.01)。表明肝复康胶囊小、中、大剂量均能降低CCl4肝损伤小鼠血清ALT的作用。 1.2.对AST活性的影响：与空白对照组AST活性(397.4±23.5U)比较，模型组(488.2±19.5U)明显升高(P＜0.01)，与模型组比较，肝复康组的AST活性显著降低，分别为436±27.8U、426.9±15.1U和454.1±24.2U(P＜0.01)。 2.肝复康胶囊对CCl4所致肝损伤小鼠肝脏病理形态学的影响。光镜下：正常对照组可见肝小叶结构清晰，肝细胞结构正常，未见纤维化及肝细胞坏死，肝细胞索结构清晰，围绕中央静脉呈放射状排列；CCl4损伤组可见肝脏正常结构被破坏，肝小叶排列紊乱，肝细胞边界不清楚，胞浆疏松，肝窦受压变窄，肝细胞大量变性坏死，有气球样变或嗜酸性变，汇管区大量淋巴细胞浸润且有大量的胶原纤维增生。经秩和检验，模型组肝损伤程度较正常对照组，显著为重(P＜0.05)。肝复康各剂量组可见肝小叶结构大致正常，肝细胞变性坏死情况较轻，与模型组比较肝脏病理改变有显著改善(P＜0.05)。 3.肝复康胶囊对CCl4所致肝损伤小鼠肝组织匀浆MDA(丙二醛)、SOD(超氧化物歧化酶)和GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)的影响。 3.1.对MDA含量(nmol/mgprot)的影响：与空白对照组(5.86±0.95)比较，肝损伤组的MDA含量(14.63±2.67)显著升高(P＜0.01)；而肝复康各剂量(9.35±1.76；6.92±1.63；9.56±1.83)均能有效改善CCl4所致的MDA含量升高(P＜0.01)。 3.2.对SOD活性(U/mgprot)的影响：与空白对照(3.62±0.36)比较，肝损伤组的SOD活性(2.03±0.40)显著降低(P＜0.01)；而肝复康各剂量(2.66±0.08、3.23±0.49、3.10±0.23)均能改善CCl4所致的SOD活性降低(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01)。 3.3.对GSH-Px活性的影响：与空白对照(29.66±0.68U)比较，肝损伤组的GSH-Px活性(16.51±0.54U)显著降低(P＜0.01)；而肝复康各剂量(19.47±0.15U、29.92±0.21U、28.46±0.63U)均能有效改善CCl4所致的GSH-Px活性降低(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01)。 4.肝复康胶囊对D-GalN所致肝损伤小鼠肝功能的影响。 4.1.对ALT活性的影响：模型组小鼠ALT活性(195±13.1U)显著高于正常空白组(32.1±4.6U)(P＜0.01)，说明D-GalN肝损伤模型复制成功。肝复康胶囊0.9g/kg、1.8g/kg和3.6g/kg均能明显降低D-GalN损伤小鼠血清ALT活性，分别为：154.8±12.9U、140.8±24.1U和180.3±15.1U，显著低于模型组(P＜0.01)。表明肝复康胶囊、中、大剂量均能显著改善D-GalN所致小鼠肝损伤。 4.2.对AST活性的影响：与空白对照组AST活性(296.4±15.2U)比较，模型组的AST活性(367±18.2U)明显升高(P＜0.01)，肝复康组的AST活性分别为323.2±31.1U、320.5±18.4U和323.6±16.9U，显著低于模型组(P＜0.01)。进一步表明本胶囊可有效改善D-GalN所致小鼠肝损伤。 5.肝复康胶囊对D-GalN所致肝损伤小鼠肝脏病理形态学观察。光镜下：正常对照组可见肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，肝细胞大小正常，肝细胞索结构清晰，肝小叶结构完整；D-GalN损伤组：全组动物均显示中毒性肝损伤病理改变，肝细胞发生广泛的水样，胞浆疏松及混浊肿胀，肝细胞可见点状和灶性坏死，可见核分裂，嗜酸性小体及脂肪变，汇管区炎性细胞浸润。模型组肝损伤较正常对照为重(P＜0.05)。肝复康各组及联苯双脂组仅个别肝细胞出现混浊肿胀，与模型组比较，肝脏病理有明显改善。 研究结论：本实验研究结果表明：肝复康胶囊能明显的降低CCl4和D-GalN肝损伤小鼠血清中ALT、AST活性，提高肝组织匀浆中SOD和GSH-Px活性，降低MDA含量，并使肝病理损伤有不同程度减轻，对肝损伤具有明显治疗作用。其保护机制可能与抗脂质过氧化有关。以上结果为肝复康胶囊临床治疗肝损伤提供了一定的药理学依据。

目录

前言

第一部分肝复康胶囊对CCl4所致肝损伤的实验研究

材料与方法

结果

第二部分肝复康胶囊对D-GlaN所致肝损伤的实验研究

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述急性腩损伤模型的建立及药物干预研究进展

致谢

个人简历