不同应激刺激后大鼠心、肝组织热休克蛋白70产生规律的研究

摘要

本实验中以肝脏与心脏为代表，在热休克、心肌缺血及心肌缺血预适应等不同应激刺激后对大鼠心脏、肝脏HSP70产生的时间和分布规律进行初步探讨，并对心、肝、脑、肺、肾等重要脏器在热休克刺激后产生HSP70量的规律及心、肝组织在其中的重要性进行了初步对比研究。 研究方法：健康SD大鼠110只，雌雄各半，体重180～250g。实验室适应24h后，随机分为六组(各组均雌雄各半)：正常对照组(n=8)、热休克组(n=24)、重度热休克组(n=6)持续心肌缺血组(n=24)、心肌缺血预适应组(n=24)和假结扎对照组(n=24)以上除第三组外其余几组皆各分三小组，各小组均为n=8，分别于术后16小时、20小时、24小时称大鼠体重，股动脉放血处死大鼠，迅速取下心脏，每组中一部分大鼠取心脏左室尖、肝左叶组织各100mg，冷冻保存，采用Westernblotting法检测组织中HSP70的表达。另一部分大鼠将心脏取下后保存于10％PBS甲醛溶液中，常规固定、石蜡包埋，用于切片做免疫组化染色及HE染色。第二组大鼠于热休克后24小时分别取心、肝、脑、肺、肾组织采用Westernblotting法检测组织中HSP70的表达。 研究结果： 1.大鼠的一般情况。除正常对照组外，经过处理的各实验组大鼠于热休克或手术后明显精神萎靡，行动迟缓，皮毛光泽较差。假结扎对照组与轻度热休克组术后不久基本恢复，重度热休克组、持续心肌缺血组和心肌缺血预适应组的大鼠恢复较慢。持续心肌缺血组死亡率较高。 2.不同应激后心、肝组织病理变化。心肌缺血组术后16小时、20小时和24小时的心肌中可见红细胞，中性粒细胞及淋巴细胞等炎性细胞浸润；可见局灶性心肌组织变性、坏死。心肌缺血预适应组、热休克组和假手术组各时间点也可见部分心肌间炎性细胞浸润和少量心肌细胞变性，但病变程度较轻。心肌缺血组、心肌缺血预适应组、热休克组和假手术组于16小时、20小时和24小时的肝脏组织上都可见部分细胞内有脂肪样变性。 3.免疫组织化学法分析不同应激后心、肝组织内HSP70的表达分布。 心肌缺血组、心肌缺血预适应组、热休克组和假手术组于16小时、20小时和24小时的心肌细胞、肝细胞的胞浆和胞核中都有HSP70表达阳性的棕黄色颗粒。HSP70表达强阳性区域多位于血管周围。 4.Westernblotting法检测不同应激后心、肝组织内HSP70的表达强度。重度热休克时心、肝组织中HSP70表达量高于常规热休克时HSP70表达量。心脏在假结扎手术及持续心肌缺血和心肌缺血预适应时的HSP70表达量高于热休克组，但心肌缺血预适应组HSP70生成量最高。肝脏在假结扎手术、持续心肌缺血、心肌缺血预适应和热休克时产生HSP70的反应敏感性基本一致。5Westernblotting法检测心、肝、脑、肺、肾组织在重度热休克后HSP70表达的比较与正常对照组比较心、肝、脑、肺、肾五种组织在热休克后HSP70的表达皆增加，其中心脏、肝脏、肾脏中HSP70的增加有显著性差异。 研究结论： 1.持续心肌缺血、心肌缺血预适应、假结扎手术和热休克等不同刺激都可引起心脏、肝脏组织中HSP70表达增多。 2.HSP70表达的增多可以对心脏和肝脏组织细胞产生明显的保护作用，特别表现在心肌缺血预适应组，其心肌病变较轻而HSP70表达较强。 3.在一定程度的热应激刺激下心、肝、脑、肺、肾组织24小时左右都出现HSP70表达的增多，以心脏、肝脏组织最为显著。 4心.脏、肝脏组织中HSP70的表达随其所受刺激种类和程度的不同而变化，HSP70的表达量随着接受的刺激强度增加而增多，心脏对持续心肌缺血、心肌缺血预适应、假结扎手术的反应性都强于肝脏，以心肌缺血预适应最为显著。 5.应激后心脏、肝脏组织不同部位HSP70表达量不同，可能与其血液循环状态有关。

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材料与方法

结果

附图

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 热休克蛋白及其功能研究现状

致谢

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