细胞周期素E与P27蛋白在子宫内膜异位症中的表达及临床意义

摘要

本研究主要探讨细胞周期素E和P27蛋白在子宫内膜异位症中的表达及临床意义。 研究方法：采用病例对照研究方法对CyclinE和P27蛋白在子宫内膜异位症中的表达进行研究。91例标本全部来源于河北医科大学第四医院妇产科2004年3月～2004年11月住院行腹腔镜手术或开腹手术治疗的患者，平均年龄41.3岁，其中卵巢巧克力囊肿40例，Ⅰ期3例，Ⅱ期9例，Ⅲ期12例，Ⅳ期16例，分期标准依据1985年美国生育协会(AmericanFertilitySociety)的修正分期法(revisedAmericanFertilitySocietyAFS-r)，Ⅰ期、Ⅱ期为早期病例，Ⅲ期、Ⅳ期为晚期病例。子宫肌腺症30例；另取其它妇科疾病(卵巢冠囊肿、宫腔纵隔、输卵管吻合、输卵管积液、子宫脱垂)的正常子宫内膜21例做为正常对照，对照组年龄与卵巢巧克力囊肿组及子宫肌腺症组相比，经统计学处理无明显差异。内异症全部病例均经组织病理学证实，术前3个月未进行过激素治疗。手术切除的卵巢巧克力囊肿标本取囊壁，子宫肌腺症取肌壁间的内膜异位组织，正常对照仅取正常内膜组织，所有标本经10％甲醛固定，石蜡包埋待切片。巧克力囊肿均做HE染色，选则有典型内膜组织的蜡块。应用免疫组织化学方法(S-P法)测定CyclinE和P27蛋白在不同子宫内膜组织中的表达。免疫组织化学步骤：石蜡切片(组织切片4μm)脱蜡至水，3％H2O2室温孵育10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性。蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟。枸橼酸盐溶液热修复20分钟(95℃以上)。PBS冲洗5分钟×3次。正常山羊血清封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，滴加鼠抗人细胞周期素E单克隆抗体工作液(1：100)，鼠抗人P27单克隆抗体工作液(1：100)，37℃孵育60分钟，PBS冲洗5分钟×3次。滴加生物素标记二抗工作液，37℃孵育20分钟，PBS冲洗5分钟×3次。滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃孵育20分钟。PBS冲洗5分钟×3次。自来水充分冲洗，复染，封片，阅片。阳性结果判定标准：阳性染色为棕褐色颗粒，CyclinE、P27蛋白阳性产物均主要定位于细胞核上。根据着色强度及范围分为阴性(-)：无阳性染色细胞或细胞着色率＜5％(0分)；弱阳性(+)：阳性细胞数5％～25％(1分)；阳性(++)：阳性细胞数25％～50％(2分)，强阳性：阳性细胞数＞50％，为统计方便视0分为阴性，1、2及3分为阳性。由两名有经验的病理科医师双盲读片。 研究结果： (1)CyclinE在不同子宫内膜组织中的表达：21例正常子宫内膜CyclinE阳性2例，阴性19例，阳性表达率9.52％；30例子宫肌腺症CyclinE阳性20例，阴性10例，阳性表达率66.7％；40例卵巢巧克力囊肿CyclinE阳性28例，阴性12，阳性表达率70.00％；可以看出CyclinE在卵巢巧克力囊肿组、子宫肌腺症组中的阳性表达率较其在正常子宫内膜组中明显增高，两组病例与正常对照组相比，差异均有统计学意义(P＜0.05)。而卵巢巧克力囊肿组与子宫肌腺症组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。 (2)P27蛋白在不同子宫内膜组织中的表达：21例正常子宫内膜P27蛋白阳性18例，阴性3例，阳性表达率85.71％，30例子宫肌腺症中P27蛋白阳性13例，阴性17例，阳性表达率43.33％；40例卵巢巧克力囊肿中P27蛋白阳性15例，阴性25例，阳性表达率37.50％；可以看出P27蛋白在卵巢巧克力囊肿组、子宫肌腺症组中阳性表达率明显降低，两组病例与正常对照组相比，差异均有统计学意义(P＜0.05)；但卵巢巧克力囊肿组与子宫肌腺症组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。 (3)CyclinE、P27蛋白在子宫内膜异症中表达的相关性：将卵巢巧克力囊肿与子宫肌腺症合并统计共70例，P27蛋白阳性28例中，CyclinE阳性13例，阴性15例；P27蛋白阴性42例中，CyclinE阳性35例，阴性7例，子宫内膜异位症中CyclinE、P27蛋白表达呈负相关(r=-0.389P＜0.05)，有统计学意义。 (4)CyclinE、P27蛋白在卵巢巧克力囊肿不同临床分期中的表达：40例卵巢巧克力囊肿中，随临床期别的增加，CyclinE阳性表达率逐渐增高，两者呈正相关(r=0.464P＜0.05)，有统计学意义，P27蛋白随临床期别的增加其阳性表达率逐渐降低，两者呈负相关(r=-0370P＜0.05)，有统计学意义；CyclinE阳性表达率Ⅲ～Ⅳ期(晚期)明显高于Ⅰ～Ⅱ(早期)，差异有统计学意义(χ2=8.6l9P＜0.05)；P27蛋白阳性表达率Ⅲ～Ⅳ期(晚期)明显低于Ⅰ～Ⅱ期(早期)，差异有统计学意义(χ2=9.974P＜0.05)。 研究结论：CyclinE和P27蛋白是两种重要的细胞周期调节蛋白，本研究显示 (1)CyclinE和P27蛋白与子宫内膜异位症的发生关系密切。 (2)CyclinE和P27蛋白的表达与临床期别有关，其期别越晚CyclinE表达越高，二者呈正相关，期别越晚P27蛋白表达越低，二者呈负相关，CyclinE高表达，P27蛋白低表达可能引起异位子宫内膜细胞的异常增生，与子宫内膜异位症的侵蚀性生长和转移有关。 (3)CyclinE和P27蛋白在子宫内膜异位症中的表达呈负相关，说明单一的CyclinE高表达，不足以导致内异症的发生，而需P27蛋白或其他更多基因的共同作用。 (4)盆腔子宫内膜异位症与子宫肌腺症在发病机制方面可能存在某些相同之处。

目录

前言

材料与方法

结果

附图1

附图2

附表

讨论

结论

参考文献

综述子宫内膜异位症恶变及分子生物学研究现状

致谢

个人简历