人腹膜间皮细胞的原代培养及其对卵巢癌SKOV3细胞黏附迁移侵袭力的影响

摘要

目的：为建立卵巢癌细胞向腹膜转移的体外黏附、迁移、侵袭模型。建立原代人腹膜间皮细胞培养法，并证实腹膜间皮细胞中部分细胞因子的表达，及其对卵巢癌SKOV3细胞黏附、迁移、侵袭力的影响。 方法：用0.25％胰酶+0.02％乙二胺四乙酸(EDTA)消化人大网膜组织，经去除红细胞后培养。在培养过程中以倒置显微镜观察细胞形态变化；HE染色观察细胞形态，并计算细胞纯度；扫描电子显微镜((SEM)观察细胞超微结构；免疫细胞组织化学法鉴定细胞；免疫细胞化学法证实腹膜间皮细胞中部分细胞因子的表达；黏附迁移侵袭实验观察其对SKOV3细胞黏附、迁移、侵袭力影响。 结果：分离培养的细胞为多角形，汇合时呈铺路石样排列；培养细胞的纯度达95％以上；SEM下见细胞表面大量的微绒毛；免疫组化显示；细胞角蛋白、波形蛋白抗原阳性，白细胞CD45、第Ⅷ因子相关抗原阴性。所有被鉴定特征均符合间皮细胞的特点。氢化可的松(0.5％)、胰岛素(20μg/ml)对间皮细胞的生长有明显的促进作用。免疫细胞化学法证实腹膜间皮细胞中表达CXCL12、MSLN，不表达CXCR4。黏附实验观察发现腹膜间皮细胞增强了SKOV3细胞的黏附力。侵袭迁移实验发现腹膜间皮细胞增强了SKOV3细胞迁移、侵袭力。 结论：胰酶+EDTA消化法是一种简单、高效、重复性高的分离腹膜间皮细胞的方法。RPMI-1640、25％小牛血清、0.5％氢化可的松、20μg/ml胰岛素是培养间皮细胞有效且廉价的配方。证实腹膜间皮细胞中表达CXCL12、MSLN，不表达CXCR4。黏附实验观察发现腹膜间皮细胞增强了SKOV3细胞的黏附力。侵袭迁移实验发现腹膜间皮细胞增强了SKOV3细胞迁移、侵袭力。

目录

论文说明：英文缩写

声明

摘要

第一部分人腹膜间皮细胞的原代培养

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分腹膜间皮细胞对卵巢癌SKOV3细胞黏附、侵袭、迁移力的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 腹膜间皮细胞在卵巢癌侵袭迁移机制中作用的研究进展

致谢

个人简历