血管紧张素原基因及肾素基因的单核苷酸多态性与脑梗死的相关性研究

摘要

目的：脑血管疾病以其高发病率、高病死率及高致残率，与心脏病、恶性肿瘤构成人类的三大致死原因。分析流行病学调查研究表明，脑卒中的危险因素可分为可干预性和不可干预性两类，可干预性危险因素是脑卒中一级预防的主要针对目标，包括高血压、心脏病、糖尿病、血脂异常、高同型半胱氨酸血症、吸烟、酗酒及肥胖等。不可干预危险因素包括年龄、性别、种族及遗传因素等。不同种族脑卒中发病率不同。有卒中家族史者较阴性家组史者更易患卒中。目前关于卒中的发病机制主要集中在分子遗传学方面。高血压是卒中最重要的危险因素，而肾素.血管紧张素系统(renin-angiotensin-system,RAS)在人体血压调节中起重要作用。本实验基于中国北方人的遗传背景，研究血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)基因及肾素(rennin,REN)基因的单核苷酸多态性(single nucletide polymorphisms,SNPs)与中国人原发性高血压(essential hypertension,EH)及脑梗死(cerebral infarction,CI)的相关关系，进一步探讨脑梗死的发生机制。 方法：(1)利用随机数字表从河北省流行病调查人群中选择82例人群对照，及78例原发性高血压患者，同时收集河北医科大学第二医院住院脑梗死患者82例。(2)调查并记录入选对象的一般情况(年龄、性别)、高血压史、糖尿病史及吸烟、饮酒史。同时检测并记录相应的生化指标值：空腹血糖、血浆总胆固醇、高密度脂蛋白、甘油三酯。(3)对入选对象抽取外周静脉血5ml，用经典的酚-氯仿抽提法提取基因组DNA。(4)参考以往文献，采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)对兴趣片段进行扩增，经电泳证实PCR产物。(5)利用特异性内切酶对扩增片段进行切割，电泳观察酶切结果。即限制性片段长度多态性分析法(restriction fragment length polymorphism,RFLP)对入选对象进行AGT基因M235T(T704C)、T174M(C521T)、A-20C、G-6A及REN基因A10631G诸位点多态性检测。(6)随机选取部分标本进行测序以验证酶切结果。上海生工生物工程技术服务有限公司完成测序。(7)相关分析：计量资料以均数加减标准差表示(x±s)，组间比较用u检验，计数资料组间比较用x2检验。经多元Logistic回归分析校正其它有意义的脑血管病危险因素，分析基因多态性与脑梗死发生的相关关系。各项统计结果以P＜0.05为有显著性差异。结果：(1)EH组与人群对照组比较：AGT基因M235T及T174M两多态性位点基因型及等位基因频率分布差异均有显著性。EH组235TT基因型及T等位基因频率分别为：57.69％，76.28％，显著高于人群对照组(35.37％，48.78％，P＜0.05)；而EH组174MT+MM基因型显著低于人群对照组(14.10％vs26.83％，P＜0.05)，M等位基因频率在EH组与人群对照组分别为7.05％，14.63％，差异有显著性。而AGT基因G-6A，A-20C两位点及REN基因A10631G位点基因型及等位基因频率多态性在两组间分布无差异。(2)CI组与人群对照组比较：AGT基因M235T及REN基因A10631G多态性位点分布有显著性差异CI组235TT基因型(53.66％)及T等位基因(70.12％)频率显著高于人群对照组(P＜0.05)：REN基因A10631G多态性位点在CI组AA型，AG型，GG型基因型频率分别为：29.27％，60.98％，9.76％，人群对照组分别为：13.41％，84.15％，2.40％，差异有显著性，而等位基因分布无显著性差异。AGT基因G-6A，A-20C及T174M位点基因型及等位基因频率多态性在两组间分布无差异。(3)CI组的两个亚组比较：高血压亚组及非高血压亚组中AGT基因M235T位点基因型及等位基因频率分布均无差异(P=0.591，P=0.898)。(4)将血浆总胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)，吸烟史及饮酒史等危险因素纳入进行Logistic回归分析，其中饮酒史是一种保护性因素，可减少脑梗死的发生(OR 0.43，P=0.0345)，余危险因素及AGT基因M235T多态位点及REN基因A10631G多态性位点未进入回归方程。结论：(1)AGT基因M235T及T174M多态性与EH的发生可能相关，235TT基因型及235T等位基因的存在可能增加EH的发生，而174MM基因型及174M等位基因的存在可能减少EH的发生。(2)AGT基因M235T及REN基因A10631G多态性可能与CI的发生相关，而且235M等位基因可能并不是通过升高血压而引起CI的。(3)AGT基因G-6A,A-20C两位点及REN基因A10631G位点多态性可能与EH的发生无相关性。(4)AGT基因G-6A，A-20C，T174M位点多态性可能与CI的发生无相关性。(5)适量饮酒可能减少CI的发生。

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综述高血压与卒中

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