大鼠药物性肝损害免疫机制的研究及保肝药物疗效的观察

摘要

目的：探讨四氯化碳引起的Wistar大鼠药物性肝损害（drug-induced liver injury，DILI）发生、发展过程中的免疫学机制；评价甘草酸二铵（Diammonium Glycyrrhizinate，DGL）及腺苷蛋氨酸（S-adenosylmethionine，SAMe）对大鼠药物性肝损害的疗效。
　　 方法：
　　 选取Wistar大鼠80只（200±20g，雌雄各半）。正常饲养1周后随机分成A、B、C、D、E、F、G、H组，共8组，每组10只。A组单纯给予生理盐水灌胃，B、C、D、E4组首次皮下注射50％四氯化碳油溶剂5ml/kg，之后皮下注射50％四氯化碳油溶剂2.5ml/kg，每周2次，制造药物性肝损害模型，共四周。C、D、E组3组造模同时分别给予甘草酸二铵375mg/kg/d、腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d及甘草酸二铵375mg/kg/d联合腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d灌胃，共四周。F、G、H组3组首次皮下注射50％四氯化碳油溶剂5ml/kg，之后皮下注射50％四氯化碳油溶剂2.5ml/kg，每周2次，制造药物性肝病模型，两周后停用四氯化碳油溶剂，分别给予甘草酸二铵375mg/kg/d、腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d及甘草酸二铵375mg/kg/d联合腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d灌胃，共两周。造模两周时随机在A、B、C、D、E5组各取两只大鼠禁食后股动脉放血处死，四周后全部大鼠禁食后股动脉放血处死。分别检测：（1）血清肝功能指标：谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）及白蛋白（ALB）（2）肝组织病理HE染色。（3）免疫指标：免疫球蛋白A（immunoglobulin A，IgA）、免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）、免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）、补体C3（complement C3）及T淋巴细胞亚群（包括CD4+及CD8+）的水平测定。其中血清肝功能指标使用全自动生化分析仪；T淋巴细胞亚群采取Expo32ADC分析方法：免疫球蛋白及补体C3采用免疫比浊法测定。
　　 结果：
　　 1.动物生存状态观察
　　 模型组大鼠精神状态差，体重与其它组比较明显减轻（P<0.05），皮毛枯稿、干涩，初期喜静少动，动作迟缓，嗜睡，后期出现翻转现象及躁动等行为失常现象；体重增加缓慢。对照组大鼠精神状态良好，皮毛浓密、光洁，体态自如；体重正常。各药物组老鼠状态较正常组稍逊，比模型组好。
　　 2.肝组织病理学改变：
　　 造模两周末取A、B、C、D、E组各两只大鼠观察肝组织HE染色病理学改变：A组可见肝细胞正常，肝板走行较好，无炎细胞浸润；B组可见肝细胞明显肿胀变性，肝板走行拥挤，散在脂肪空泡及点灶状坏死，肝窦轻度淤血扩张；C组可见肝细胞轻度肿胀变性，散在分布脂肪空泡及点灶状坏死；D组可见肝细胞肿胀变性，弥漫分布的脂肪空泡变性，弥漫分布的点灶状坏死，肝板走行拥挤紊乱；E组可见肝细胞轻度肿胀变性，弥漫分布的脂肪空泡，少量点灶状坏死。
　　 四周末各组肝组织HE染色病理学改变：A组可见肝细胞正常，肝板走行较好，无炎细胞浸润。B组可见弥漫分布的点灶状坏死，肝细胞明显肿胀变性，可见明显毛细小胆栓，间质反应活跃。C组可见肝细胞肿胀变性，点灶状坏死较明显，零散分布的脂肪空泡。D组可见肝细胞轻度肿胀变性，偶见点状坏死，散在地脂肪空泡，部分肝细胞浆胆色素沉积。E组可见肝细胞肿胀变性较明显，可见少量坏死灶，散在分布的脂肪空泡，部分肝细胞浆胆色素沉积。F组可见肝细胞轻度肿胀变性，可见散在点灶状坏死，零散分布的脂肪空泡，肝板走行尚可。G组可见散在脂肪空泡，少量点灶状坏死，可见小胆栓及但色素沉积，间质反应活跃。H组可见肝细胞轻度肿胀变性，可见散在点灶状坏死，零散分布的脂肪空泡，肝板走行尚可。
　　 3.免疫指标
　　 3.1 细胞免疫的指标（CD4+、CD8+及CD4+/CD8+）
　　 A、B、C、D、E、F、G、H组8组CD8+分别为：17.18±2.58、23.46±3.08、16.31±6.19、17.09±10.70、19.91±7.09、17.26±3.77、15.77±3.54、16.00±3.76；A、B、C、D、E、F、G、H组8组CD4+/CD8+分别为：2.41±0.59、1.55±0.24、2.47±0.72、2.92±1.87、2.25±0.59、2.93±0.76、3.30±1.04、3.33±0.78；B组CD8+、CD4+/CD8+水平与A组CD8+、CD4+/CD8+水平比有明显差别（P<0.05）；B组CD8+、CD4+/CD8+与C、D、E组无明显差别（P>0.05）；
　　 A、B、C、D、E、F、G、H组8组CD4+分别为：40.78±5.37、35.75±3.70、37.01±7.33、37.29±9.34、42.27±9.77、48.65±7.89、49.35±9.68、50.87±6.22；B组CD4+与A、C、D、E组CD4+均无明显差别（P>0.05）；
　　 3.2 体液免疫的指标（IgA、IgG、IgM及补体C3）
　　 A、B、C、D、E、F、G、H组8组血清IgM水平分别为：0.13±0.02、0.45±0.17、0.20±0.06、0.21±0.09、0.18±0.05、0.14±0.02、0.14±0.04、0.13±0.04；B组血清IgM的水平与A、C、E组比较均有明显升高（P<0.05）；B组血清IgM的水平与D组相比无明显差别（P>0.05）；
　　 A、B、C、D、E组血清IgA、IgG的水平无明显差别（P>0.05）；
　　 A、B、C、D、E、F、G、H组8组血清补体C3水平分别为：0.30±0.14、0.18±0.13、0.47±0.05、0.36±0.16、0.47±0.06、0.26±0.13、0.15±0.09、0.19±0.12。B组血清补体C3水平与C、E组相比较均有明显升高（P<0.05）；B组血清补体C3水平与A、D组比无明显差别（P>0.05）；
　　 4.肝功能指标（AST、ALT、TBIL及ALB）：
　　 B组血清ALT、AST、TBIL的水平与A、C、D、E组相比较均有明显升高（P<0.05），B组血清ALB的水平与A、C、D、E组相比较有明显降低（P<0.05），A、C、D、E组血清ALT、AST、TBIL、ALB水平无明显差别（P>0.05）；A、F、G、H组血清ALT、AST、ALB、TBIL的水平无明显差别（P>0.05）。
　　 结论：
　　 1.应用四氯化碳皮下注射的方法可以成功制作大鼠药物性肝病模型。
　　 2.细胞免疫及体液免疫均参与了药物性肝损害的发病过程。在细胞免疫方面，CD8+及CD4+/CD8+与药物性肝损害的发病关系密切；在体液免疫方面，IgM与药物性肝损害发病过程有关，但尚不能确定IgA、IgG及补体C3是否参与了药物性肝损害的发病过程。
　　 3.甘草酸二铵及腺苷蛋氨酸对药物性肝病均有明显的保肝降酶作用，其中，甘草酸二铵的保肝作用可能与改善体液免疫有一定关系。

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结论

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综述 药物性肝损害与免疫

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