大鼠蛛网膜颗粒(绒毛)在颅内的分布及结构特点以及蛛网膜下腔出血后蛛网膜颗粒(绒毛)细胞凋亡的研究

摘要

本课题分两部分，第一部分主要研究大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）在颅内的分布及其结构特点；第二部分探讨大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）细胞凋亡在蛛网膜下腔出血（SubarachnoidHemorrhage，SAH）后的表达。
　　 第一部份大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）在颅内的分布及其结构特点
　　 目的：
　　 明确大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）在颅内的分布及其结构特点，为实验取材及其相关研究奠定基础。
　　 材料与方法：
　　 采用26只健康清洁的成年Wistar大鼠作为实验动物。10只用于蛛网膜下腔注射亚甲蓝液研究蛛网膜颗粒（绒毛）的分布情况，手术做寰枕部直切口，暴露寰枕筋膜，1ml注射器刺入寰枕筋膜，进入小脑延髓池，抽出脑脊液0.1ml后，再缓慢注入亚甲蓝液0.15ml，1.5小时后取材观察。8只用于蛛网膜颗粒（绒毛）的HE染色研究，动物经心脏灌注4％多聚甲醛后取材，石蜡包埋，从左到右轴位连续切片，每张切片厚0.5μm，间隔5张取片1张，光镜下观察、采集图片。8只用于电子显微镜的研究，动物经灌注2％戊二醛后取材，经固定、修快，制片后，电子显微镜下观察、照相。
　　 结果：
　　 （1）通过大鼠蛛网膜下腔注射亚甲蓝的方法，我们发现注入亚甲蓝后大鼠蛛网膜下腔广泛蓝染，每只大鼠横窦内均有很明显的燃料浓集区，而其余部分燃料浓集很少，说明大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）主要分布在横窦内。
　　 （2）大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）HE染色的结果发现：大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）具有最外层的内皮细胞层，纤维囊，蛛网膜细胞层，以及中央核。其形态及不规则，有的呈球形，有的则以分叶状或匍匐生长。
　　 （3）通过连续切片统计分析，大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）主要分布在横窦两侧中部偏内的位置。
　　 （4）扫描电子显微镜观察结果显示：大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）主要成簇分布，数目不等。大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）上皮间存在裂隙和小孔洞，在上皮间可见微绒毛和球样突起，微绒毛分布不均匀，可见聚集成簇的花样结构。
　　 （5）透射电子显微镜观察结果显示：在大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）表面的内皮细胞的表面，可以见到伸向窦腔的胞质突起和质膜小泡。
　　 结论：
　　 （1）大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）与人蛛网膜颗粒具有基本相同的结构（具有内皮细胞层、纤维囊、蛛网膜细胞层和中央核）。大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）主要位于横窦两侧中部偏内的部分。
　　 （2）电镜研究的结果说明了蛛网膜颗粒（绒毛）的微细结构，这些支持了脑脊液吸收入血的两种机制。
　　 第二部分大鼠蛛网膜颗粒（绒毛）细胞凋亡在蛛网膜下腔出血后的表达
　　 目的：
　　 通过动物实验分析蛛网膜下腔出血（SAH）后蛛网膜颗粒（绒毛）细胞的凋亡情况，为进一步研究蛛网膜下腔出血（SAH）后治疗方案的选择提供思路。
　　 材料与方法：
　　 48只健康清洁成年Wistar大鼠，随机分为A、B、C、D、E、F6组，每组8只。A组为对照组，不做任何处理，B、C、D、E、F5组为实验组，经血管内穿刺出血，制作蛛网膜下腔出血（SAH）模型。对照组大鼠10天取材，实验组按1天、3天、5天、7天、10天取材。手术做大鼠颈部正中切口，分离暴露大鼠颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉及其在颈部的分支，电凝阻断其各分支动脉。分离迷走神经，小动脉夹阻断颈总动脉、颈内动脉，结扎颈外动脉并剪断，在其近心端向头颅方向插入带尖尼龙线拴，打开动脉夹，刺破颅内动脉，制作出血模型。所有大鼠在各时间点灌注-固定后取材（对照组于10天取材）。选取横窦制成石蜡切片，采用三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记染色法（TUNEL法）观察蛛网膜颗粒（绒毛）的细胞凋亡情况并计数，进行统计学分析。
　　 结果：
　　 蛛网膜下腔出血后缺口末端标记染色法研究鼠蛛网膜颗粒（绒毛）细胞凋亡结果显示：A组蛛网膜颗粒（绒毛）偶见凋亡细胞，B、C、D、E、F5组中随着出血后时间的延长凋亡细胞逐渐增多，其中蛛网膜细胞、内皮细胞、纤维细胞均有凋亡。
　　 结论：
　　 蛛网膜下腔出血后，由于出血、缺血、炎症等反应过程，使蛛网膜颗粒（绒毛）细胞出现过度的凋亡，影响蛛网膜颗粒（绒毛）吸收脑脊液的功能，这可能与蛛网膜下腔出血后脑积水的形成有关。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一部份 大鼠蛛网膜颗粒(绒毛)在颅内的分布及其结构特点

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

第二部分 大鼠蛛网膜颗粒(绒毛)细胞凋亡在蛛网膜下腔出血后的表达。

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

参考文献

综述 蛛网膜下腔出血动物模型制作及其损伤机制的研究

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