BMP-7、TGF-β1在cGVHD狼疮样小鼠肾组织的表达及雷公藤多苷联合白芍总苷的干预作用

摘要

目的：系统性红斑狼疮（SLE）是一种具有多系统损害及多种自身抗体的自身免疫性疾病，可累及全身各组织器官。狼疮肾炎（LN）是SLE最重要的临床表现之一，肾脏病变的严重程度是直接影响SLE预后的重要因素。近年研究表明，转化生长因子β1（TGF-β1）与多种肾病的发生、发展有明显相关性，可促进肾小球系膜细胞和内皮细胞增生以及细胞外基质（ECM）的合成和积聚，从而加重肾小球硬化和间质纤维化。本研究在建立慢性移植物抗宿主病（cGVHD））狼疮小鼠模型的基础上，观察其肾组织中BMP-7及TGF-β1的表达情况及TG联合TGP的干预作用，探讨BMP-7、TGF-β1在LN病理过程中的可能作用和TG联合TGP治疗LN的可能机制以及TGP联合TG的增效减毒作用，为临床中药有效成分配伍治疗LN提供实验依据。
　　 方法：⑴（C57BL/6J×DBA/2）F1（即B6D2F1）雌性杂交鼠，建立慢性移植物抗宿主病（cGVHD）狼疮模型。将成模小鼠随机分6组：模型组（LN group）、泼尼松组（Pred group）、来氟米特组（LEF group）、雷公藤多甙组（TG group）、白芍总苷组（TGP group）、雷公藤多苷+白芍总苷组（TG+TGP group）。另设正常对照组（Control group）。⑵在造模后第9周，正常对照组、模型组给予生理盐水灌胃，其他各组分别给予泼尼松、来氟米特、雷公藤多苷、白芍总苷、雷公藤多苷和白芍总苷灌胃治疗，共4周。⑶在造模及用药前后观察小鼠的一般情况。⑷在治疗第4周末，各组小鼠全部处死。处死前1d置于代谢笼内收集24小时尿标本，检测24小时尿蛋白排泄率（UPE）。⑸从心脏取血，离心，-50℃保存，检测尿素（BUN）、肌酐（SCr）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）。⑹摘取肝脏制成组织匀浆，检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）。⑺取肾脏组织进行固定、石蜡包埋，经HE染色、PAS染色和Masson染色，光镜下观察肾脏组织病理变化并进行对比。⑻采用免疫组织化学染色法检测BMP-7、TGF-β1在肾组织的表达，并采用彩色病理图文报告分析系统对其表达量进行半定量分析。⑼所有实验数据均采用SPSS13.0软件包进行统计学处理，所得结果以均数士标准差（X±s）表示。各组间均数比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）。方差分析前进行方差齐性检验，采用LSD法进行组间两两比较。相关性分析采用Pearson相关检验，以P<0.05认为有统计学意义。
　　 结果：①与正常对照组相比，LN组小鼠的UPE、BUN、SCr均显著增高（P<0.01）。与模型组相比，Pred组、LEF组、TG组、TGP组、TG+TGP组均可有效降低LN小鼠的UPE、BUN、SCr，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。同时TG+TGP组与TG组比较，上述指标均有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。②与正常对照组、LN组相比，LEF组、TG组小鼠的ALT、AST均显著增高（P<0.01）。与TG组相比，TG+TGP组的ALT、AST均显著降低（P<0.01）。③与正常对照组、LN组相比，LEF组、TG组小鼠的SOD、GSH均显著降低（P<0.05或P<0.01）。与TG组相比，TG+TGP组的SOD、GSH均显著增高（P<0.01）。④病理结果显示，正常对照组小鼠肾脏未见明显病变。LN组小鼠肾小球系膜增宽、基底膜增厚、肾间质淋巴细胞浸润。各治疗组小鼠肾脏病变均较LN组有所减轻，其中以TG+FGP组病变最轻。⑤BMP-7在正常对照组小鼠肾组织中高度表达，主要分布于肾小管及肾间质，而在肾小球内基本无表达。LN组小鼠肾小管及肾间质BMP-7的表达明显减少，各治疗组较LN组小鼠肾小管及肾间质BMP-7的表达增强。⑥正常对照组小鼠仅在少数肾小管有微弱TGF-β1表达。LN组小鼠肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞、血管内皮细胞、肾小球和肾间质浸润的炎症细胞胞质均有TGF-β1显著表达。各治疗组TGF-β1的表达均减弱。⑦各组小鼠肾组织中BMP-7表达与UPE、BUN、SCr水平均呈显著负相关，r分别为-0.814、-0.555、-0.766（P均<0.01）。各组小鼠肾组织中。TGF-β1表达与UPE、BUN、SCr水平均呈显著正相关，r=0.800、0.684、0.740（P均<0.01）。⑧各组小鼠肾组织中BMP-7与TGF-β1的表达呈显著负相关，r=-0.665（P<0.01）。
　　 结论：⑴BMP-7是维持肾脏功能稳定的一个重要因子，BMP-7在狼疮肾炎中具有与TGF-β1相反的作用，其表达水平下降可能参与了狼疮肾炎的发生、发展。⑵雷公藤多苷、雷公藤多苷联合白芍总苷对cGVHD狼疮肾炎小鼠有显著的治疗作用；上调BMP-7表达、下调TGF-β1表达可能是其肾脏保护作用的重要机制。⑶雷公藤多苷联合白芍总苷对cGVHD狼疮肾炎小鼠的治疗作用以及对BMP-7、TGF-β1表达的干预作用优于单用雷公藤多苷，提示白芍总苷与雷公藤多苷有明显的协同/增效作用。⑷雷公藤多苷可导致肝脏损伤，其机制与氧化损伤有关；白芍总苷对雷公藤多苷所致的肝损伤具有保护作用，抗氧化损伤可能是其作用机制之一。⑸中药有效成分雷公藤多苷与白芍总苷配伍治疗cGVHD狼疮肾炎具有增效减毒作用，该用药模式提示了中药现代化的新思路和新途径。

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述一狼疮肾炎免疫发病机制研究进展

综述二狼疮肾炎中医药治疗研究进展

致谢

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