银杏叶提取物和罗格列酮对高脂喂养大鼠胰腺NF-κB表达和β细胞凋亡影响的研究

摘要

目的：通过高脂喂养诱导大鼠胰岛素抵抗（insulin resisitance，IR）模型，测定胰腺组织核因子-κB（Nuclear factor-κB NF-κB）表达、胰岛β细胞凋亡情况及血液中炎症因子白介素1-β（interleukin1-β，IL-1β）水平，并给予银杏叶提取物和罗格列酮治疗，研究其在改善IR及保护胰岛β细胞功能中的作用。
　　 方法：①64只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组，n=16）和高脂喂养组（HF组，n=48），NC组给予基础饲料喂养，HF组给予高脂饲料喂养4周。两组各取8只大鼠行高胰岛素正葡萄糖钳夹试验。其余高脂喂养大鼠随机分为高脂对照组（HF组）继续给予高脂饲料喂养4周；罗格列酮（RSG）组，银杏叶提取物4mg-1kg-1d（EGB1）组，银杏叶提取物8mg-1kg-1d（EGB2）组，银杏叶提取物12mg-1kg-1d（EGB3）组，每组n=8。在高脂喂养同时分别给予相应药物干预。②于实验第8周末各组大鼠行口服葡萄糖耐量试验和高胰岛素正葡萄糖钳夹试验。③钳夹后处死大鼠留取血标本和胰腺组织标本。用生化分析仪测定血脂，铜显色法测定游离脂肪酸，Western blot检测胰腺组织NF-κ B蛋白表达，酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）测定IL-1β水平；末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位缺口标记技术（terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nickend labeling，TUNEL）检测胰岛β细胞凋亡。
　　 结果：1.实验第4周末，与NC组相比，HF组大鼠体重（body weight，BW）有所增加，但差异无统计学意义；游离脂肪酸（free fatty aicd，FFA）、空腹血糖（fasting plasma glucose， FPG）、空腹胰岛素（fasting plasma insulin，FIN）升高，葡萄糖输注率（glucose infusion rate，GIR）下降。试验第8周末，与NC组相比，HF组大鼠体重有所增加，但差异无统计学意义；FFA、FPG、FIN、甘油三酯（triglyceride TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）升高，GIR继续下降。2.试验第8周末，与NC组相比，各药物干预组大鼠体重、FFA、FPG、FIN、TG、 TC、GIR均无明显差异。与HF组相比，RSG组TC、TG、FPG、FIN、FFA下降，GIR升高；银杏叶各组上述指标改善程度不同：EGB1组TC、TG、FFA下降；FPG、FIN、GIR变化不明显。EGB2、EGB3组TC、TG、FFA、FPG、FIN均下降，GIR升高。与EGB1组比较，EGB2、EGB3组TG、FIN降低，EGB3组FFA降低，GIR升高。RSG组与EGB2、3组之间各项指标差异均无统计学意义。3.试验第4周末，与NC组比较，HF组血糖在0min、60min、120min升高，曲线下面积AUC升高。试验第8周末，与NC组比较，HF组大鼠0min及糖负荷后60min、120min血糖及曲线下面积AUC均升高。与HF组比较，EGB1组0min、120min血糖降低；EGB2、3组和RSG组0min、120min血糖和AUC下降。EGB2组60min血糖较RSG组及EGB1组下降，EGB3组120min血糖低于EGB1组和EGB2组。4.试验第8周末，与NC组相比，HF组IL-1β浓度升高，与HF组比较，各药物干预组IL-1β浓度降低，各药物干预组之间差异无统计学意义。5.Western blot：与NC组比较，HF组胰腺组织NF-κB表达升高，与HF组比较，EGB2组及RSG组胰腺组织NF-κB表达降低，EGB2和RSG组之间无明显差异。6。TUNEL：与NC组相比，HF组大鼠胰岛β细胞凋亡率升高；EGB1、2、3组及RSG组大鼠胰岛β细胞凋亡率无变化。与HF组相比，RGS、EGB1、EGB2、EGB3组大鼠胰岛β细胞凋亡率降低，RGS与EGB1、EGB2、EGB3之间无明显差异。
　　 结论：1.高脂喂养大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸、空腹血糖、空腹血清胰岛素不同程度升高，血清炎症因子IL-1β浓度升高，胰腺组织细胞核内转录因子NF-κB蛋白水平升高，葡萄糖输注率降低，胰岛β细胞凋亡率升高，口服葡萄糖耐量实验证实高脂喂养大鼠对糖负荷的处理能力下降。2.银杏叶提取物及罗格列酮可以降低高脂饮食大鼠血清胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸，增加葡萄糖输注率，调节糖耐量，改善高脂饮食大鼠的胰岛素敏感性。并呈现出一定的剂量相关性，即中、高剂量银杏叶提取物干预对胰岛素敏感性及相关指标的改善作用优于低剂量组。3。银杏叶提取物及罗格列酮干预可降低高脂喂养大鼠血清IL-1β水平，降低其胰腺组织NF-κB蛋白表达，减少胰岛细胞凋亡数目。

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综述 炎症因子在2型糖尿病发病机制中的作用

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