消炎镇痛液不同途径伍用牛痘疫苗致炎兔皮提取物对大鼠坐骨神经损伤修复的作用

摘要

目的：周围神经损伤尤其是慢性卡压所致的坐骨神经损伤是临床上的常见病，其功能恢复的程度直接影响着病人生活的质量，因此如何促进受损神经的再生与修复一直是临床研究的重要课题。影响神经再生与修复的因素很多，其中损伤处的微环境是最主要的影响因素。一直以来常用的消炎镇痛液对微环境起着重要的调节作用，目前随着牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液（Extract from Rabbit Skin lnflamed by Vaccinia V irus for lnjection，ERSVV）越来越多的用于神经修复的治疗，其给药途径从肌肉注射、静脉输注到腹腔神经丛、蛛网膜下腔也在不断拓宽。本实验采用SD大鼠，参照Bennett and Xie设计的坐骨神经慢性卡压模型，探讨消炎镇痛液伍用ERSVV，ERSVV于受损神经周围直接给药对神经修复的作用是否优于肌肉注射。旨在为临床治疗提供依据。
　　 方法：雄性SD大鼠80只，体重280+20克，随机分为4组，每组20只：A组为假手术组（正常对照组），B组为模型组（卡压对照组），C组为神经周围给予消炎镇痛液，肌肉注ERSVV，D组为神经周围给予消炎镇痛液和ERSW。用10％水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉后，大鼠左侧卧位于操作台上，股部去毛，在无菌操作下暴露右下肢坐骨神经。A组仅暴露神经而不进行结扎处理，即缝合切口；B、C、D三组行CCI造模。选择坐骨神经分成三支前的1cm主干部位，以4/0铬制羊肠线松扎四道，每道间隔1mm，打结松紧以肢体轻微抽动为宜，并在神经管旁置管缝合切口。对侧下肢肌注庆大霉素（0.2ml，10mg/ml）预防感染。各组每天经导管注射注射用水0.2ml，防止导管阻塞。造模后14天大鼠行为反应最强烈更易激惹，取材后镜下观察到神经水肿、轴突变性、数目减少、髓鞘崩解（Guilband报道该模型建立需要14天）证明CCI模型制备成功。B组14天后继续经导管注射注射用水0.2ml直至取材.C、D两组在14天通过所置的管注射消炎镇痛液（5mg/ml复方倍他米松0.05ml+2％利多卡因0.05ml+0.5mg/ml维生素B120.05ml+灭菌用水0.05ml）.从第15天始，C组每天注射混合液0.2 ml（注射用水0.1ml+2％利多卡因0.05ml+0.5mg/ml维生素B120.05ml），同时肌肉注射ERSVV0.1ml。D组是将ERSVV0.1ml加在混合液中替代注射用水，直到取材。四组分别于CCI术后第14天、21天、28天测坐骨神经功能指数（Sciatic functional index，SFI）；并且在各组中随机取7只大鼠，麻醉下暴露坐骨神经，观察神经的大体变化；测量神经传导速度（nerve conduction velocity，NCV）及振幅（Amplitude，APT）并取材；在光镜和电镜下观察坐骨神经的超微结构、作图样分析计算神经轴突数目和髓鞘厚度；用免疫组化法观察神经生长因子（Nerve growth factor，NGF）的数目变化。
　　 结果：
　　 1.SFI A组约为-0.2各时间点无明显变化。B组维持在-33左右。C、D组第21天均高于B组而低于A组：第28天C组明显大于B组（P<0.05）；D组大于B组非常显著（P<0.01）；D组明显大于C组（P<0.05）；组内比较C、D两组28天时明显优于21天时（P<0.05），优于14天时更为明显（P<0.05）。
　　 2.NCV与AMP与A组比，B、C、D三组第21天降低非常显著（P<0.01）；第28天明显降低（P<0.05）。21、28天C、D两组均高于B组（P<0.05）；D组明显高于C组（P<0.05）；C、D两组分别与28天、14天时进行组内比较升高非常显著（P<0.05；P<0.01）。
　　 3.轴突计数和髓鞘厚度C、D组第21、28天均大于B组低于A组；D组明显大于C组（P<0.05）； C、D两组分别与28天、14天时进行组内比较升高非常显著（P<0.05；P<0.01）。
　　 4.免疫组织化学 A组的NGF不表达或少量表达。B、C、D、E组在变性及再生神经纤维的轴索和雪旺细胞（SC）的胞膜均有一定数量的表达。图像分析结果显示：损伤处神经的平均灰度指数：组内比，B、C、D三组28天均大于21天和14天；但B组无统计学意义；21、28天时C、 D两组均大于B组（P<0.05；P<0.01），D组大于C组（P<0.05）。
　　 5.大体及组织病理学观察大体观察 A组神经光滑，与周围组织无粘连。造模后14天，B、C、D各组坐骨神经明显充血、水肿、增粗，外膜颜色较红。21、28天B组减轻不明显，C、D组充血、水肿明显减轻，外膜的颜色较14天时变白。D组充血、水肿明显轻于C组。光镜下观察A组神经纤维排列整齐，髓鞘完好。第14天时B、C、D组神经纤维排列紊乱，髓鞘脱落神经水肿严重，神经轴突密度减少，可见大量的脱落髓鞘。在28天时B组神经纤维的排列和轴突数目有所增多，但与C、D两组同时间比较有明显差异。C、D组的神经纤维排列较整齐，方向性较好，雪旺细胞增殖明显，神经纤维生长较好，而D组明显优于C组，镜下可见髓鞘变厚、轴突数量增多。上述神经修复情况28天C、D两组明显好于21天。电镜下观察在第14天时，A组神经完整，结构规则；第28天时B组轴突部分断裂，脊膜消失融合，微丝微管减少。C组大部分脊膜消失融合，可见微丝微管，损伤较轻，髓鞘变厚，板层变规则，但D组有髓神经纤维的数量、轴突直径、髓鞘厚度、轴突内线粒体、微丝、微管、数量等均大于D组。C、D两组修复情况均明显好于21天时。
　　 结论：1.消炎镇痛液伍用ERSVV有利于损伤神经的修复。2.ERSVV神经周围给药对受损神经的修复作用比肌肉注射更好。

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结论

参考文献

综述 慢性卡压性神经损伤的研究进展

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