CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠不同脑区cAMP-PKA信号转导通路影响的研究

摘要

目的：吗啡等毒品的滥用引起成瘾者对依赖药物的强烈渴求，导致他们不顾后果地继续觅药和用药行为，从而引发一系列严重的社会问题。研究表明，cAMP-PKA信号通路在介导阿片类物质依赖和戒断中发挥着重要的作用。八肽胆囊收缩素（cholecystokinin octapeptide，CCK-8）作为目前已知的作用最强的内源性抗阿片肽，参与吗啡耐受的形成，但有关CCK-8对吗啡对戒断症状及其信号转导通路的影响报道甚少。本课题通过研究CCK-8对吗啡戒断大鼠的戒断症状及不同脑区（海马、皮质、尾壳核）cAMP含量及PKA活性的影响，探讨CCK-8及受体拮抗剂在吗啡戒断中的作用，为阿片类成瘾及戒毒研究提供了新的干预靶点及手段。
　　 方法：选用健康雄性Wistar大鼠66只，体重190g～220g，随机分为11组：吗啡依赖组（Mor组）、纳洛酮催促戒断组（NAL组）、急性溶剂对照组（Mor+Vehicle+Nal组）、急性CCK-8干预组（Mor+CCK-8+Nal组）、急性CCK-AR拮抗剂L-364，718干预组（Mor+L-364，718+Nal组）、急性CCK-BR拮抗剂LY-288，513干预组（Mor+LY-288，513+Nal组）、慢性溶剂对照组（Vehicle+Mor+Nal组）、慢性CCK-8干预组（CCK-8+Mor+Nal组）、慢性CCK-AR拮抗剂L-364，718干预组（L-364，718+Mor+Nal组）、慢性 CCK-BR拮抗剂LY-288，513干预组（LY-288，513+Mor+Nal组）和生理盐水对照组（N.S组）。应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡（10～50mg·kg-1，每日2次，连续5天）建立吗啡依赖模型，第6天8时给予吗啡一次50mg·kg-1，2小时后注射纳洛酮5mg·kg-1建立催促戒断模型，以腹腔注射CCK-8及受体拮抗剂进行干预。模型建立后急性分离大鼠皮质、海马、尾壳核，采用放射免疫法或酶联免疫吸附法（ELISA）检测上述脑区cAMP含量和PKA的活性。用SPSS11.5统计软件对实验数据进行统计分析，以P<0.05为有显著性差异。
　　 结果：
　　 1、CCK-8及受体拮抗剂对吗啡戒断症状的影响
　　 NAL催促戒断后大鼠体重下降明显多于MOR组（P<0.05），说明催促戒断模型建立成功。CCK-8及CCK-AR拮抗剂 L-364，718和CCK-BR拮抗剂LY-288，513均可抑制戒断大鼠体重减轻和其他戒断症状的发生。
　　 2、CCK-8及受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠不同脑区cAMP含量影响
　　 吗啡依赖组大鼠海马cAMP含量显著高于对照组，戒断后cAMP含量进一步升高，且均有显著差异（P<0.05）；在尾壳核吗啡依赖组大鼠cAMP含量显著低于对照组，戒断组cAMP含量较依赖组有显著升高，且均有显著差异（P<0.05）；而在皮质cAMP含量在各组之间均无显著差异（P>0.05）。
　　 每次给予吗啡前30min预先腹腔注射50μg·kg-1CCK-8、1mg·kg-1 CCK-AR拮抗剂L-364，718、1mg·kg-1 CCK-BR拮抗剂LY-288，513，可使纳洛酮催促戒断后尾壳核、海马的cAMP含量降低，与戒断组相比有显著差异（P<0.01），而额叶皮质与戒断组相比无显著差异（P>0.05）。纳洛酮急性催促戒断前30min单次注射5mg·kg-1 L-364，718、5mg·kg-1LY-288，513，使戒断后尾壳核、海马cAMP含量明显下降（P<0.01），皮质则无明显变化（P>0.05）；单次给予100μg·kg-1CCK-8后作用不明显，尾壳核、海马和额叶皮质cAMP含量与戒断组相比均无显著差异。
　　 3、CCK-8对吗戒断大鼠不同脑区 PKA活性的影响
　　 每次给予吗啡前30min预注射50μg·kg-1CCK-8、1mg·kg-1CCK-AR拮抗剂L-364，718、1mg·kg-1CCK-BR拮抗剂LY-288，513，可使纳洛酮催促戒断后尾壳核、海马的PKA活性降低（P<0.01），而皮质未发生明显变化（P>0.05）。纳洛酮催促戒断前30min单次注射5mg·kg-1L-364，718、5mg·kg-1LY-288，513均使戒断后尾壳核、海马 PKA活性降低，与戒断组相比有显著差异（P<0.01），皮质未发生明显变化（P>0.05）；单次给予100μg·kg-1CCK-8后，海马、尾壳核和额叶皮质PKA活性均未发生明显变化（P>0.05）。
　　 结论：CCK-8及其受体拮抗剂干预能够抑制吗啡依赖大鼠催促戒断反应，该作用可通过调节cAMP-PKA信号转导途径来实现；尾壳核、海马是CCK-8及其受体拮抗剂发挥抑制吗啡戒断症状作用的重要脑区。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一部分 CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠不同脑区cAMP含量的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠不同脑区PKA活性的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 阿片类物质依赖相关神经递质研究进展

致谢

个人简历