血清骨形成标志物与骨骼纵向生长关系的研究

摘要

目的：通过检测骨形成标志物-血清骨钙蛋白（osteocalcin，OC）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP）、Ⅰ型前胶原羧基端前肽（carboxyterminal propeptide of type Ⅰprocollagen，PICP）水平，探讨骨形成标志物与骨骼纵向生长的关系，为评价骨骼纵向生长筛选可靠有效的血清学指标。
　　 方法：选择刚断乳3周龄清洁级纯系SD大鼠20只。此时大鼠约相当于人类的学龄前期儿童。按体重随机分为地塞米松组12只，对照组8只。根据《动物实验方法》给出的公式：公斤体重剂量（mg/kg）dB=dA·RB/RA·（WA/WB）1/3换算出大鼠的地塞米松剂量。dB为大鼠需要的每公斤体重剂量，dA是人的每公斤体重剂量，WA是人的标准体重，WB是大鼠的标准体重，RA是人的体型系数为0.1，RB是大鼠的体型系数为0.09。对于人，地塞米松剂量（dA）为0.15-0.3mg/kg，换算出大鼠的剂量为100-200μg/100g。本研究中，选择200μg/100g作为地塞米松干预剂量。地塞米松组大鼠每日腹腔注射地塞米松200μg/100g体重，对照组大鼠注射等容积生理盐水，连用10天。此时大鼠约为人类青春发育前期。每日称量体重。采用10％水合氯醛麻醉后宰杀大鼠，采集静脉血，测量鼻尾长。大鼠取俯卧位测量鼻尾长，即大鼠俯卧状态下，鼻尖到尾末端的距离。分离胫骨，测量胫骨长度。胫骨的长度为近端关节面和远端关节面之间的直线距离，每一胫骨同一人员测量3次，取平均值。制备胫骨生长板组织切片。将胫骨组织置于3.8％甲醛溶液固定，4℃，过夜。15％EDTA脱钙2周。将脱钙的胫骨组织置于4％多聚甲醛溶液固定，梯度酒精脱水（70％、80％、90％、95％、95％、100％），二甲苯透明，石蜡包埋，切片机做连续5微米切片后贴片。VG法、Masson三色法、Mallory三色法等组织学特殊染色方法，Leica Qwin数字图像分析仪直接测量生长板厚度、增值带和肥大带厚度。测定血清OC、AP、PICP浓度。SPSS16.0统计软件包处理数据。所有资料进行方差齐性及正态分布的检验，计量数据均以均数±标注差（x±s）表示，两组间比较用t检验，两变量之间相关性用Pearson相关分析。
　　 结果：
　　 1.地塞米松组大鼠体重、鼻尾长、胫骨长、生长板总厚度、增殖带厚度、肥大带厚度分别为：97.71±8.95 g、27.82±1.03 cm、28.94±1.17 mm、4.01±0.28 μ m、1.98±0.13 μm、1.67±0.18 μ m；对照组大鼠体重、鼻尾长、胫骨长、生长板总厚度、增殖带厚度、肥大带厚度分别为：127.87±12.68g、30.29±0.97cm、30.54±1.06mm、5.53±0.46 μ m、2.25±0.30 μ m、2.86±O.19 μ m；两组间比较，P<0.05，地塞米松组大鼠各项物理测量参数均显著落后于对照组大鼠。
　　 2.地塞米松组大鼠血清OC、.AP、PICP水平分别为：0.48±0.15 ng/ml、80.18±19.47 U/L、42.67±12.06 pg/ml；对照组大鼠血清OC、AP、PICP水平分别为：0.46±0.16 ng/ml、76.60±1.69 U/L、37.57±16.98 pg/ml，两组间比较，P>0.05，OC、AP、PICP水平无明显差异。
　　 3.地塞米松组大鼠体重、鼻尾长、胫骨长、生长板总厚度、增殖带厚度、肥大带厚度和血清学指标的相关性分析：肥大带厚度与AP呈负相关，r=-0.605，p=0.037。其余物理测量参数和血清学指标均无相关性。
　　 4.对照组大鼠体重、鼻尾长、胫骨长、生长板总厚度、增殖带厚度、肥大带厚度和血清学指标的相关性分析：鼻尾长及体重与PICP均呈正相关，相关系数分别为r=0.725，p=0.042和r=0.820，p=0.013。其余物理测量参数和血清学指标均无相关性。
　　 5.地塞米松组血清学各指标之间的相关性分析：AP与PICP呈负相关，r=-0.606，p=0.037。其余血清学指标之间无相关性。
　　 6.对照组血清学各指标之间的相关性分析：OC与PICP呈正相关，r=0.868，p=0.005。其余血清学指标之间均无相关性。
　　 结论：
　　 1.糖皮质激素抑制骨骼纵向生长。
　　 2.糖皮质激素对生长发育阶段的大鼠成骨细胞功能抑制作用不明显。
　　 3.血清Ⅰ型胶原羧基端前肽可能是反映骨骼纵向生长的潜在指标。

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结果

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附表

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结论

参考文献

综述 骨骼纵向生长的研究

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