ASC、caspase-1及IL-1β在牙周炎牙周组织中表达的动物实验研究

摘要

目的:通过建立大鼠牙周炎模型,采用Envision免疫组织化学染色法,观察ASC、caspase-1及IL-1β在大鼠牙周炎牙周组织中的农达,分析三者在大鼠牙周组织中随炎症程度不同表达的变化及其相关关系.进一步探讨大鼠牙周炎炎症机制。
　　 方法:选用6月龄纯种雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组,每组10只:正常组、牙周结扎2周组(2周组)、牙周结扎4周组(4周组)、牙周结扎8周组(8周组)。2周组、4周组和8周组大鼠在全麻下,以直径0.20mm钢丝结扎双侧上颌第一磨牙牙颈部。结扎组从结扎当天起高糖(葡萄糖100g/L)饮水,软食(糖水浸泡)。结扎组动物分别于结扎2周、4周、8周后处死,取上颌骨,10％甲醛溶液固定48小时,10％EDTA溶液脱钙8周,制作牙体牙周组织连续切片。HE染色,光镜观察牙周组组织形态学变化;免疫组织化学染色法(Envision法)检测各组牙周组织中 ASC、caspase-1和IL-1β的表达分布,作统计学分析。
　　 结果:
　　 1大鼠牙周炎动物模型建立:
　　 牙周结扎组动物上颌第一磨牙牙体牙周组织联合切片组织学观察:结扎4周,上皮钉突明显伸长、增多,上皮下结缔组织内可见大量炎细胞浸润;牙周膜内血管扩张;结合上皮向根方增殖,形成牙周袋;破骨细胞活跃,牙槽骨吸收。说明大鼠牙周炎动物模型成功建立。
　　 2实验大鼠牙周组织组织学观察:
　　 正常组:牙龈上皮无明显的炎细胞浸润,结合上皮位于釉牙骨质界处,牙龈纤维及牙周膜纤维排列整齐有序,牙槽嵴顶无破坏吸收。
　　 2周组:牙龈上皮钉突增生,上皮下结缔组织内可见炎细胞浸润,牙槽骨结构完整。
　　 4周组:牙龈上皮下方结缔组织中大量中性粒细胞、淋巴细胞等炎细胞浸润,结合上皮向根方增殖、延伸,形成牙周袋;牙槽嵴边缘可见破骨细胞及骨吸收陷窝。
　　 8周组:牙龈结合上皮继续向根方增殖,形成深牙周袋,牙周膜血管扩张、增多,胶原纤维排列紊乱,牙周膜内可见以浆细胞、淋巴细胞、中性多形核白细胞为主的炎细胞浸润灶。牙槽骨垂直吸收,边缘可见明显的破骨细胞和骨吸收陷窝。
　　 3免疫组化染色检测实验大鼠牙周组织中ASC、caspase-1和IL-1β表达:
　　 3.1 ASC在牙周组织中的表达:
　　 ASC阳性染色为棕黄色或棕色颗粒,主要定位于上皮细胞、中性粒细胞、单核.巨噬细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等细胞胞浆中。在正常组牙周组织中呈弱阳性表达:在2周组、4周组、8周组牙周组织中呈阳性表达,炎细胞浸润灶处呈强阳性表达。四组平均光密度值分别为:正常组,0.0188;2周组,0.0291;4周组,0.0390:8周组,0.0529。
　　 3.2 Caspase-1在牙周组织中的表达:
　　 Caspase-1阳性染色为棕黄色或棕色颗粒,主要位于上皮细胞、中性粒细胞、单核-巨噬细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等细胞胞浆中。在正常组牙周组织中呈弱阳性表达;在2周组、4周组、8刷组牙周组织中呈阳性表达,炎细胞浸润灶处呈强阳性表达。四组平均光密度值分别为:正常组,0.0219;2周组,0.0327;4周组,0.0489;8周组,0.0604。3.3 IL-1β在牙周组织中的表达:
　　 IL-1β阳性染色为棕黄色或棕色颗粒,主要位于上皮细胞、中性粒细胞、单核-巨噬细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等细胞胞浆及牙周膜基质中。在正常组牙周组织中呈弱阳性表达;在2周组、4周组、8周组牙周组织中呈阳性表达,炎细胞浸润灶处呈强阳性表达。四组平均光密度值分别为:正常组,0.0222;2周组,0.0296:4周纽,0.0439;8周组,0.0558。4阳性染色强度(平均光密度值OD)统计分析结果:
　　 四组牙周组织中ASC表达的平均光密度值比较:8周组＞4周组＞2周组＞正常组(P＜0.05)。
　　 四组牙周组织中caspase-1的平均光密度值:8周组＞4周组＞2周组＞正常组(P＜0.05)。
　　 四组牙周组织中IL-1β的平均光密度值:8周组＞4周组＞2周组＞正常组(P＜0.05)。
　　 5三者相关性分析结果:
　　 四组ASC和caspase-1的相关系数分别为:0.772、0.898、0.840、0.848,均呈正相关关系。
　　 四组ASC和IL-1β的相关系数分别为:0.770、0.893、0.795、0.812,均呈正相关关系。
　　 四组caspase-1和IL-1β的相关系数分别为:0.847、0.863、0.803、0.804,均呈正相关关系。
　　 结论:
　　 1结扎法成功建立大鼠牙周炎模型,随结扎时间延长,炎症程度增加。
　　 2各组大鼠牙周组织中均检测到ASC、caspase-1和IL-1β的表达。
　　 3 ASC、caspase-1及IL-1β在大鼠牙周组织中的表达随牙周炎症程度增加而增加,提示ASC/caspase-1/IL-1β可能在大鼠牙周炎炎症进程中起重要作用。
　　 4 ASC、caspase-1和IL-1β在大鼠牙周炎组织中的表达呈正相关关系,提示ASC/caspase-1/IL-1β可能在大鼠牙周炎炎症进程中起协同作用。

目录

文摘

英文文摘

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 ASC及相关的细胞冈子与炎症关系的研究进展

致谢

个人简历