肾癌组织中TβRⅠ、Ⅱ基因甲基化状态的检测及其临床意义

摘要

目的：肾细胞癌（Renal cell carcinoma，RCC）是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，发病率居泌尿系统肿瘤的第二位，其中以肾透明细胞癌(Renal clear cell carcinoma，RCCC)最为常见。近年来肾癌的发病率逐渐上升，且发病呈年轻化趋势。由于肾癌发病隐匿，早期未引起患者重视和及时就诊，致使病情延误，严重影响患者的生存率及生活质量，而癌细胞转移是导致患者死亡的重要因素，此过程包括癌细胞脱离原发灶、浸润周边组织、进入循环系统和淋巴系统、转移到远处器官增殖形成转移灶。肾癌的发病机理目前尚未明了，为降低肾癌的发病率和死亡率就要对其发病机制进行研究。
　　 本项研究以肾透明细胞癌为研究对象，探讨转化生长因子β受体Ⅰ、Ⅱ(TβRⅠ、Ⅱ)在肾透明细胞癌中的甲基化状态及其蛋白表达，进一步了解TβRⅠ和TβRⅡ在肾透明细胞癌发生、发展、浸润、转移中的作用及二者之间的相互关系，寻求潜在的具有临床意义的诊疗指标，从而为肾透明细胞癌的发病机制，基因治疗及临床预后等方面提供新的理论和试验依据。
　　 方法：
　　 1.应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR，MSP)技术检测43例肾透明细胞癌组织，43例癌旁正常组织中TβRⅠ、Ⅱ基因的甲基化状况。
　　 2.应用免疫组织化学(immuno-histochemistry，IHC)P-V法检测40例肾透明细胞癌组织，28例癌旁正常组织中TβRⅠ、Ⅱ基因的蛋白表达情况。
　　 3.运用统计软件SPSS13.0对数据进行统计学分析。
　　 结果：
　　 1.甲基化状态：
　　 1.1 TβRⅠ基因在RCCC组及癌旁正常组中的甲基化率分别为51.2％
　　 1.1 TβRⅠ基因在RCCC组及癌旁正常组中的甲基化率分别为51.2％(22/43)和39.5％(17/43)，两组的甲基化率差异无统计学意义(P＞0.05)；在肾透明细胞癌中，TβRⅠ基因在小于60岁组的甲基化发生率52.0％(13/25)大于60岁以上（包括60岁）组的甲基化发生率50.0％(9/18)，但无显著统计学差异(P＞0.05)；男性甲基化率53.8％(14/26)大于女性甲基化率47.1％(8/17)，差异亦无统计学意义（P＞0.05）；肿瘤直径≤7cm的TβRⅠ基因甲基化率为51.6％(16/31)，肿瘤直径＞7cm的甲基化率为50.0％(6/12)，无统计学差异(P＞0.05)；高中分化组的TβRⅠ基因甲基化率为58.8％(20/34)，低分化组的甲基化率为22.2％(2/9)，差异无统计学意义。
　　 1.2 TβRⅡ基因在RCCC组及癌旁正常组中的甲基化率分别为58.1％(25/43)和34.9％(15/43)，差异有统计学意义，RCCC组的甲基化率显著高于癌旁正常组(P＜0.05)；在肾透明细胞癌中，TβRⅡ基因在小于60岁组的甲基化发生率60.0％(15/25)大于60岁以上（包括60岁）组的甲基化发生率55.6％(10/18)，但无显著统计学差异（P＞0.05）；男性甲基化率61.5％(16/26)大于女性甲基化率52.9％(9/17)，差异亦无统计学意义(P＞0.05)；肿瘤直径≤7cm的TβRⅡ基因甲基化率为54.8％(17/31)，肿瘤直径＞7cm的甲基化率为66.7％(8/12)，无统计学差异(P＞0.05)；高中分化组的TβRⅡ基因甲基化率为64.7％(22/34)，低分化组的甲基化率为33.3％(3/9)，差异无统计学意义。
　　 1.3两基因联合甲基化分析：20例RCCC组织中TβRⅠ、Ⅱ基因同时发生甲基化，12例癌旁正常组织中两基因同时发生甲基化，癌中同时发生率为46.5％高于癌旁正常组的27.9％，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 2.蛋白表达情况：
　　 2.1应用免疫组化P-V法检测40例肾透明细胞癌组织和28例癌旁正常组织TβRⅠ蛋白表达情况，阳性表达率分别为52.5％(21/40)和89.29％(25/28)，二者具有显著性差异(P＜0.05)。
　　 2.2应用免疫组化P-V法检测40例肾透明细胞癌组织和28例癌旁正常组织TβRⅡ蛋白表达情况，阳性表达率分别为60.0％(24/40)和92.86％(26/28)，二者具有显著性差异（P＜0.05）。
　　 2.3在肾透明细胞癌组织中，TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达与患者年龄和性别无关（P＞0.05），与肿瘤的大小和肿瘤分化程度相关(P＜0.05)。
　　 3.蛋白表达与甲基化之间的关系：
　　 在TβRⅠ蛋白表达阳性的RCCC组织中，其甲基化阳性率为66.7％(14/21)，在TβRⅠ蛋白表达阴性的RCCC组织中，其甲基化阳性率为36.8％(7/19)，两者差异无统计学意义（P＞0.05）。在TβRⅡ蛋白表达阳性的RCCC组织中，其甲基化阳性率为70.8％(17/24)，在TβRⅡ蛋白表达阴性的RCCC组织中，其甲基化阳性率为43.8％(7/16)，两者差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论：
　　 1.TβRⅠ基因在RCCC组及癌旁正常组中甲基化发生率无统计学意义，且TβRⅠ基因甲基化与临床资料无关，提示TβRⅠ基因启动子甲基化可能与RCCC的发生发展无关；TβRⅡ基因在RCCC组的甲基化发生率显著高于癌旁正常组的甲基化发生率，但TβRⅡ基因甲基化与临床资料无关，提示TβRⅡ基因启动子甲基化可能与RCCC的发生有关，而与其发展可能无关。
　　 2.两基因在RCCC组及癌旁正常组中甲基化同时发生率无统计学意义，提示两基因启动子同时发生甲基化可能亦与RCCC的发生无关。
　　 3.TβRⅠ、TβRⅡ基因蛋白表达在RCCC组均显著低于癌旁正常组，提示TβRⅠ、TβRⅡ基因蛋白表达异常可能与RCCC的发生有关。
　　 4.T[3RⅠ、TβRⅡ蛋白表达与患者年龄和性别无关，与肿瘤的大小和肿瘤分化程度相关，提示TβRⅠ、TβRⅡ蛋白水平表达的下调或缺失可能参与了肾透明细胞癌的发展，浸润，转移。
　　 5.TβRⅠ、TβRⅡ甲基化阳性率在蛋白表达阳性的RCCC组织与蛋白表达阴性的RCCC组织中差异无统计学意义，提示甲基化可能不是导致蛋白表达异常的主要原因。

目录

文摘

英文文摘

肾癌组织中TβRⅠ、Ⅱ基因甲基化状态的检测及其临床意义

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 TGF-β受体Ⅰ、Ⅱ甲基化与肿瘤的关系

参考文献

致谢

个人简历