热疗对人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的影响及逆转耐药机制的研究

摘要

目的:通过体外实验观察热疗对人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP增殖、耐药性、耐药相关基因生存素(Survivin)与谷胱甘肽转硫酶π(GSTTπ)的影响,及热化疗对SGC7901/DDP细胞的作用,进一步阐明热疗逆转胃癌多药耐药的作用机制,为临床应用热疗及热化疗提供理论依据。
　　 方法:1选取人胃癌SGC7901/DDP细胞系进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay,MTT)法检测热疗不同温度(41℃、42℃、43℃、44℃)、不同时间(0.5h、1h、2h)联合化疗与否对SGC7901/DDP细胞增殖的影响,并选择热疗最佳匹配温度与时间。2采用MTT比色法分别检测最佳匹配温度和时间时热疗处理前后人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的增殖抑制作用,测定其吸光度(OD)值,计算热疗前后的IC50值,根据相关公式测定热疗后的耐药逆转倍数。3流式细胞仪分别测定化疗(耐药浓度1μg/ml)、热疗及热化疗对SGC7901/DDP细胞周期分布和凋亡的影响。4应用流式细胞术(flowcytometry,FCM)定量检测对照组、化疗组、热疗组及热化疗组SGC7901/DDP细胞中Survivin、GST-π蛋白表达的变化;采用逆转录-聚合酶链反应(revers transcriptionPCR,RT-PCR)法半定量检测上述四组SGC7901/DDP细胞中Survivin、GST-πmRNA表达的变化。
　　 结果:1 MTT结果显示:与对照组相比,单纯化疗组处理细胞后测得OD值与对照组相比无统计学差异。热疗不同时间,不同温度联合化疗与否均能明显抑制SGC7901/DDP细胞体外增殖,随着时间的延长、一定范围内温度的提高,抑制率相应增高,与对照组相比,有极显著差异性(P＜0.01)。而热化疗联合组抑制率高于热疗组,差异具有统计学意义(P＜0.01)。在热疗温度为43℃、时间为2h时抑制率达高峰,而在44℃时抑制率有所下降。热疗联合化疗效果更为显著。2经热疗43℃、2h处理后人胃癌SGC7901/DDP耐药细胞的IC50值由11.72μg/ml降为7.19μg/ml,逆转倍数为1.63倍。3流式细胞仪检测SGC7901/DDP细胞周期分布和凋亡显示:化疗、热疗、热化疗作用SGC7901/DDP细胞后,与对照组相比,化疗组细胞周期无明显变化(P＞0.05),热疗组、热化疗组G0/G1细胞逐渐增多,S期逐渐减少,G2/M期相对增多。即热疗、热化疗可阻滞SGC7901/DDP细胞周期进程于G1期。化疗、热疗、热化疗处理SGC7901/DDP细胞后凋亡率逐渐下降,凋亡百分率分别为0.64％、2.05％、9.34％,与对照组(0.56％)相比,化疗组无明显变化(P＞0.05),热疗组、热化疗组较对照组有显著性差异(P＜0.01),且以热化疗组变化最为显著。4 FCM测定Survivin、GST-π蛋白表达结果显示:化疗、热疗、热化疗处理SGC7901/DDP细胞后Survivin、GST-π蛋白表达荧光指数(FI值)分别为1.011、0.736、0.629及1.015、0.751、0.408。与对照组相比,化疗组无明显变化(P＞0.05),热疗组、热化组明显降低,具有极显著性差异(P＜0.01),且热化疗组与热疗组比较下降更为显著(P＜0.01)。表明热疗、热化疗可使Survivin、GST-π蛋白表达呈下降趋势,以热化疗组对Survivin、GST-π蛋白表达抑制最为显著。5 RT-PCR检测结果显示:化疗组、热疗组、热化组SGC7901/DDP细胞的Survivin mRNA、GST-π mRNA的表达水平分别由对照组的1.005±0.03及0.693±0.01降低为0.995±0.06、0.900±0.04,0.752±0.01及0.693±0.02、0.608±0.03,0.470±0.02。与对照组相比,化疗组无明显变化(P＞0.05),热疗组、热化疗组明显降低,具有极显著性差异(P＜0.01),且热化疗组较热疗组下降更为显著(P＜0.01)。
　　 结论:1本实验证实在一定温度范围内,热疗能够抑制人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的增殖,尤以43℃,2h时抑制率最高。热疗联合化疗时效果更为明显。2热疗、热化疗可阻滞人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP于G1期并可诱导该细胞凋亡,阻滞细胞周期诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制之一。3热疗43℃,2小时能最大限度的增加人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP对化疗药物DDP的敏感性,并部分逆转其耐药性。下调Survivin蛋白及GST-π蛋白及mRNA的表达为热疗逆转人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药性的机制之一。4本实验证实热疗具有逆转胃癌多药耐药的作用,及热疗联合化疗对胃癌耐药细胞株的增殖抑制作用,为胃癌耐药的综合治疗提供了新的方法。

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 胃癌顺铂耐药机制的研究进展

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