精索静脉曲张对睾丸支持细胞及睾丸组织内睾酮的影响

摘要

目的:建立实验性精索静脉曲张(varicocele,VC)大鼠模型,通过测定睾丸组织内雄激素结合蛋白、抑制素B的表达变化,及睾丸组织内睾酮的浓度,了解VC对睾丸支持细胞分泌功能的损害作用,及对睾丸组织内源性睾酮分泌的影响,探讨VC导致不育的机制。
　　 方法:
　　 选择鼠龄(50±10)天(青春期),体重240～280g的SD(Sprayue-Dawley)雄性大鼠40只。将大鼠按随机化原则分为精索静脉曲张组(试验组)20只,假手术组(对照组)20只。
　　 动物模型依据Turner的方法建立:实验组大鼠以10％水合氯醛(3.33ml/kg)腹腔注射麻醉,取腹正中切口约5cm,切开全层腹壁,暴露腹腔。确认左肾静脉,左肾上腺中央静脉,左精索静脉位置后,仔细分离左肾静脉,在左肾上腺中央静脉与下腔静脉之间,平行左肾静脉放置一根直径约0.8mm的金属杆,用4-0丝线将其与左肾静脉一同结扎,使静脉直径大约缩小一半。结扎完成后抽出金属杆,可见左肾静脉迅速扩张。用4-0的丝线缝合伤口。对照组大鼠在显露左肾静脉后只穿线打结,而不缩窄左肾静脉。
　　 术后12周,大鼠脱颈椎法处死,后取下腹正中切口,依据精索静脉最大直径＞1mm,左右肾重量无明显差别为模型建立成功标准,后将左侧睾丸上推入腹腔,观察睾丸大小变化,将睾丸附睾一并剪下,仔细剪除附睾及周围筋膜等附属组织,用冷盐水洗净,滤纸吸干水分。将睾丸平均切成两半,一半剪除白膜后称重,后放入玻璃匀浆器内,按1:2(重量:体积)的比例加入磷酸缓冲液后研磨,4℃过夜,次日以3000转/分,离心15min,取上清液置于Eppendof管于-20℃保存待测。另一半睾丸组织,置于10％中性甲醛溶液中固定24小时,后梯度脱水,石蜡包埋组织块。
　　 睾丸组织内雄激素结合蛋白、抑制素B的测定采用组织切片,免疫组织化学染色方法检测。睾丸组织内睾酮浓度测定采用AccessTestosterone(化学发光法)测定,使用BECKMAN COULTER DX I800全自动免疫分析仪严格按规定流程测定样本睾酮浓度。
　　 计量资料采用-x±s表示,样本均数的比较利用两独立样本t检验,非参数检验采用Wilcoxon秩和检验,采用SPSS13.0软件进行统计分析,采用双侧检验,以P＜0.05为有统计学意义。
　　 结果:
　　 1 睾丸组织雄激素结合蛋白的测定结果:术后12周,通过免疫组织化学方法测定,实验组大鼠左侧睾丸组织雄激素结合蛋白(ABP)免疫组织化学评分(IHS)Median=6.00,P25=4.00,P50=6.00,P75=8.25,对照组IHS评分Median=6.00,P25=4.50,P50=6.00,P75=9.00,经Wilcoxon秩和检验无统计学差异,P＞0.05。
　　 2 睾丸组织内抑制素B的测定结果:术后12周,同样利用免疫组织化学方法测定,实验组大鼠左侧睾丸抑制素B(InhB)的免疫组化评分(IHS)为Median=5.00,P25=4.00,P50=5.00,P75=6.00,对照组IHS评分Median=7.50,P25=4.50,P50=7.50,P75=9.00,与对照组相比实验组InhB表达减少,经秩和检验差异具有统计学意义,P＜0.05。
　　 3 睾丸组织内睾酮水平的测定:术后12周,通过Access Testosterone法测定睾丸组织匀浆提取液的睾酮浓度,实验组大鼠左侧睾丸组织匀浆提取液的睾酮浓度为94.79±3.31nmol/L,对照组为109.10±6.37nmol/L,与对照组相比睾酮水平明显下降,差异具有统计学意义,P＜0.05。
　　 4 睾丸损伤的病理变化:睾丸组织损伤的病理变化突出表现是曲细精管内出现程度不同的生精细胞脱落,实验组SD大鼠睾丸组织的病理改变包括,1、生精细胞的脱落,严重者可发生管腔堵塞,但未发现唯支持细胞综合征等严重病理改变。2、可见界膜增厚、纤维化和透明样变性;3、睾丸间质水肿、间质细胞变性(胞浆空泡样变);4、睾丸间质血管的病理改变,包括小动脉的病变(管壁增厚、管腔缩小甚至闭塞),小静脉扩张充血及淋巴管扩张。
　　 结论:
　　 1 精索静脉曲张后,睾丸雄激素结合蛋白的表达并无显著降低。
　　 2 精索静脉曲张引起睾丸支持细胞抑制素B生成减少,可使其对间质细胞的促进作用减弱。
　　 3 精索静脉曲张使睾丸组织内睾酮水平降低,影响精子的发育、成熟,进而导致男性不育。