盆底功能障碍性疾病患者阴道壁成纤维细胞受力后生物力学功能的变化

摘要

目的：1、了解盆底功能障碍性疾病(pelvic floor dysfunion，PDF)阴道壁成纤维细胞受力前、受力后Ⅰ型胶原(colⅠ)、Ⅲ型胶原(colⅢ)、转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因的表达水平。
　　 2、从细胞外基质的变化探讨力学因素在PFD发病中的作用。
　　 3、从细胞力学水平探讨盆底功能障碍性疾病的发病机制。
　　 方法：1、研究对象：选自2009年10月-2010年7月河北医科大学第二医院妇科因PFD住院手术患者的阴道壁组织，共12例，所有患者均按照美国盆底器官脱垂定量分期法(pelvic organ prolapsequantitation，POP-Q)评分，每位患者均完成尿动力实验，其中POP患者中至少一个部位符合POP-Q分类法的Ⅲ-Ⅳ度(子宫脱垂合并阴道前壁脱垂3例，合并阴道后壁脱垂5例，单纯前后壁脱垂4例)，所有患者中合并压力性尿失禁者3例，单纯脱垂而无压力性尿失禁者9例。平均年龄为58.3±9.6岁，平均产次2.9±1.2次。所有患者均排除呼吸系统、心血管系统及皮肤系统疾病等结缔组织异常性疾病。采取标本均得到患者的同意，并签署知情同意书。
　　 2、所取标本经体外培养后，对其进行鉴定，确定为阴道壁成纤维细胞后，送至生物力学实验室，将阴道壁成纤维细胞于FX-4000TM细胞柔性基底拉伸系统加载(0.3HZ、12％、正弦波)。以加载力后4小时、15小时、24小时的阴道壁成纤维细胞为实验组；以静态培养的阴道壁成纤维细胞为对照组。
　　 3、采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对对照组、受力后4小时、15小时、24小时Ⅰ型胶原(colⅠ)、Ⅲ型胶原(colⅢ)、转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因的表达水平进行检测，所得数据用SPSS13.0分析，以P<0.05为有统计学意义。
　　 结果：1、所培养组织于培养接种后9-10天开始有细胞自组织块边缘游离出来。呈梭形，边界清楚，祛除组织块后约30天成纤维细胞融合，呈条索状及漩涡状。免疫细胞化学抗波形蛋白染色阳性表达率91.6％，结合取材部位，证实为阴道壁成纤维细胞。
　　 2、阴道壁成纤维细胞在FX-4000TM细胞柔性基底拉伸系统加载(0.3HZ、12％、正弦波)下，随着受力时间(4小时、15小时、24小时)的延长，细胞的形态特征及排列方式均发生了变化。成纤维细胞随加载力时间的延长而变得排列有序。
　　 3、对照组colⅠ m RNA的表达水平为1.178±0.071，受力后4、15、24小时表达分别为1.092±0.038、1.198±0.031、1.120±0.098，四者比较，差异有统计学意义(P=0.035)；对照组colⅢ m RNA的表达水平为0.673±0.029，受力后4、15、24小时表达分别为0.313±0.019、0.504±0.033、0.853±0.210，四者相比，差异有统计学意义(P=0.015)；对照组TGF-β1m RNA的表达水平为0.852±0.039，受力后4、15、24小时表达分别为0.673±0.052、0.897±0.051、0.895±0.015，四者相比，差异有统计学意义(P=0.0001)；对照组MMP-1m RNA的表达水平为1.167±0.036，受力后4、15、24小时表达分别为0.669±0.109、1.085±0.176、1.325±0.048，四者相比，差异有统计学意义。(P=0.017)。
　　 结论：1、PFD阴道壁成纤维细胞原代培养成功。
　　 2、PFD患者，其阴道壁成纤维细胞在受力的情况下，colⅠ、colⅢ、TGF-β1、MMP-1随着受力时间的变化发生了相应的变化，这些细胞外基质的变化，有可能在盆底功能障碍性疾病的发生中起重要作用。