Fascin蛋白和E-钙粘蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

摘要

目的：口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinomas OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，其发病率较高。根据癌细胞的分化程度可分为高、中、低分化鳞状细胞癌，它们均具有侵袭和转移的特性。目前认为肿瘤是一种多基因性疾病，是一个多基因变异不断累积的结果。已有研究表明，口腔鳞状细胞癌的发生、发展、侵袭转移也涉及到癌基因激活及抑癌基因失活等多基因的变异。
　　 Fascin蛋白又称为聚束蛋白，是一种肌动蛋白结合蛋白，参与细胞的运动和黏附功能。它与F-肌动蛋白结合后的结构加强了肌动蛋白细胞骨架，对细胞移动起着重要作用。研究发现Fascin蛋白的增加可引起肿瘤细胞膜表面突起增多，增殖旺盛，影响细胞粘附能力的改变，改变细胞与细胞外基质的黏附能力，增强肿瘤细胞的运动能力，以及通过细胞信号转导通路等途径增强肿瘤组织的局部侵袭转移能力，Fascin蛋白在多种肿瘤组织和癌前病变组织中呈现上调表达。
　　 E-钙粘蛋白(E-cadhernin，E-cad)编码基因定位于16号染色体q22.1附近，是介导上皮细胞间粘连的一种细胞粘附分子，对Ca2+有高度敏感性。在生理条件下E-cad对维持组织结构形态、调节细胞运动、及参与维持细胞之间、细胞与基质之间的黏附力都具有重要作用。目前研究认为E-cad是一种抑癌基因，当其在肿瘤组织中活性正常时，肿瘤细胞不易从原发灶上脱落，E-cad通过加强细胞间的黏附力及抑制细胞增殖来发挥抑癌功能；而其活性降低或失活时则导致细胞黏附功能下降从而促进肿瘤细胞转移。研究表明E-cad的表达下降与肿瘤的分化程度、发展、淋巴结转移的发生及预后密切相关。
　　 近年来研究发现，很多人类肿瘤出现Fascin蛋白和E-钙粘蛋白的异常表达，并且与肿瘤的侵袭转移以及患者的预后密切相关。本研究通过免疫组化的方法检测二者在口腔鳞状细胞癌中的表达及与口腔鳞状细胞癌组织学分级的关系，为口腔鳞状细胞癌的预后判断及临床治疗提供依据，并进一步探讨二者作为判断患者预后标记物和治疗靶点的前景。
　　 方法：本试验选取存档的60例口腔鳞状细胞癌标本蜡块和40例口腔正常粘膜组织蜡块，分为试验组(OSCC组)和对照组(NM组)。口腔鳞状细胞癌标本均进行HE染色后经有经验的病理医师阅片后确诊，其中高分化鳞癌31例，中分化鳞癌21例，低分化鳞癌8例。将每个蜡块切为4-5μm的切片，共切4张，1张HE染色，1张Fascin蛋白染色，1张E-钙粘蛋白染色，1张作为阴性对照。用已知的Fascin蛋白阳性的胃癌标本和已知的E-钙粘蛋白阳性正常肠粘膜标本作为阳性对照，以PBS代替-抗作为阴性对照，运用SP免疫组织化学法进行试验。
　　 Fascin蛋白染色判定参照Hashimoto的标准，以细胞膜和细胞浆显示弥漫性棕黄色颗粒为阳性染色，每张切片随机计数10个高倍视野，每个视野计数100个细胞。据阳性细胞百分率判定：(1)未见棕黄色颗粒为阴性；(2)<25％为弱阳性(+)；(3)25％-75％为阳性(++)；(4)>75％为强阳性(+++)。
　　 E-钙粘蛋白以细胞膜上出现棕黄色膜性染色作为正常表达的阳性标记。而位于细胞浆中或胞膜与胞浆共同有连续线状或斑点状黄色至棕黄色颗粒沉积者为异常阳性表达，无染色者为阴性表达。每张切片随机计数10个高倍视野，每个视野计数100个细胞。据阳性细胞百分率判定：(1)阴性：无染色，阳性细胞数<25％；(2)弱阳性：胞浆染色浅，阳性细胞数26％～50％；(3)中度阳性：胞膜胞浆混合染色，阳性细胞数51％-75％；(4)强阳性：胞膜连线状均匀染色，阳性细胞数>75％。
　　 采用SPSS17.0软件进行统计学分析，试验结果采用x2检验，P<0.05有统计学意义。
　　 结果：1.Fascin蛋白的表达：对照组中，40例正常口腔粘膜标本均呈阴性表达，试验组中，60例口腔鳞状细胞癌标本共41例呈现阳性表达，阳性率为68.33％，阳性率显著高于对照组。经统计学分析x2值为46.33，P<0.01，有统计学意义。
　　 2.E-钙粘蛋白的表达：对照组中，40例正常口腔粘膜标本有38例呈强阳性表达，2例呈异常阳性，异常阳性率为5％，试验组中，60例口腔鳞状细胞癌标本有21例呈强阳性表达，39例呈现异常阳性表达，异常阳性率为65％显著高于对照组。经统计学分析x2值为35.72，P<0.01，有统计学意义。
　　 3.Fascin蛋白和E-钙粘蛋白的表达与临床病理指标的关系：二者的表达均与鳞癌的组织学分级具有相关性，鳞癌的分化越低，Fascin蛋白的阳性表达和E-钙粘蛋白的异常阳性率表达越高P<0.05，而与患者性别、年龄无显著相关性P>0.05。
　　 结论：1.在口腔鳞状细胞癌标本中Fascin蛋白表达阳性率显著高于在正常粘膜中的表达，且与口腔鳞状细胞癌的病理分级相关。提示Fascin蛋白可能在口腔鳞状细胞癌的进展、转移过程中发挥一定的作用。
　　 2.在口腔鳞状细胞癌标本中E-钙粘蛋白的膜性表达阳性表率明显低于正常粘膜中的表达，且与口腔鳞状细胞癌的病理分级相关。提示E-cad在口腔鳞状细胞癌的进展、转移过程中可能发挥着重要的作用。
　　 3.经过更进一步的研究Fascin蛋白和E-钙粘蛋白有望成为判断口腔鳞状细胞癌患者预后的指标，并有望成为临床基因治疗的主要靶点。