神经元型一氧化氮合酶和突触体素在妊娠期甲亢仔鼠海马中的表达

摘要

目的：妊娠期甲亢为内分泌系统常见疾病，患病率为0.1％～0.2％。育龄期妇女易发生甲状腺疾病。过量甲状腺激素可导致机体代谢紊乱，影响各系统的功能。妊娠期甲亢可以引起早产，新生儿甲亢和甲减等。甲状腺激素参与脑神经细胞的增殖、迁移、分化，其作用是通过调控许多结构蛋白和信号蛋白的表达实现的。甲状腺激素同时影响突触的发育及髓鞘等的形成，从而引起脑发育过程中功能和行为的异常。一氧化氮(nitric oxide，NO)以逆行递质的方式参与突触可塑性和长时程增强效应，体内过量的NO产生和释放，可以通过自由基或其他途径产生神经毒性，加重神经元损害。神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)是NO合成的限速酶。突触体素(synaptophysin，Syn)是一种特异性糖蛋白，分布于中枢神经系统大多数突触的前囊泡膜上。突触体素的表达可以反映突触数量和大小的变化。本研究通过观察甲亢仔鼠海马突触体素及神经元型一氧化氮合酶的表达来研究妊娠期甲状腺功能亢进母鼠对仔鼠脑发育的影响，为进一步研究甲状腺激素对智力的影响及其预防措施提供理论依据。
　　方法：将雌性SD大鼠随机分为正常对照组(N组)，轻度甲亢组(A组)，重度甲亢组(B组)。通过给予不同剂量左甲状腺素钠连续灌胃方法，制作大鼠甲状腺功能亢进模型。模型成功后各组雌性大鼠以2:1比例与雄性SD大鼠合笼，A组B组雌鼠受孕后继续给予左甲状腺素钠灌胃，N组雌鼠给予同等量生理盐水。观察每组母鼠及所生雄性仔鼠一般情况。测定仔鼠21天和60天甲状腺功能，观察其0天，21天，60天海马HE染色组织病理结构并应用western blotting技术观察各组仔鼠各时期海马神经元型一氧化氮合酶和突触体素的表达。
　　结果：
　　1.妊娠母鼠的一般情况：轻度甲亢组母鼠进食饮水量较正常对照组稍增加，活动增加，大小便增多，对外界刺激反应灵敏；重度甲亢组大鼠进食饮水量较正常对照组明显增加，易激惹，对外界反应亢奋，大小便增多(大便呈糊状)，表现出明显的高代谢体征。
　　2.仔鼠的一般情况：正常对照组仔鼠生长发育良好，逐渐长出绒毛，绒毛色泽好，轻度甲亢组和重度甲亢组仔鼠生后较正常对照组体重减少，绒毛生长缓慢，无光泽，且重度甲亢组仔鼠此种表现更为明显。
　　3.母鼠甲状腺功能测定：随着甲亢症状的加重，FT3、FT4逐渐增高，TSH逐渐降低。轻度甲亢组与重度甲亢组FT3、FT4均较正常对照组显著升高(P＜0.05)，且重度甲亢组FT3、FT4较轻度甲亢组显著升高(P＜0.05)；轻度甲亢组与重度甲亢组TSH均较正常对照组显著降低(P＜0.05)，且重度甲亢组TSH较轻度甲亢组降低(P＜0.05)。
　　4.仔鼠甲状腺功能测定：21天时轻度甲亢组和重度甲亢组FT3、FT4较正常对照组增高(P＜0.01)，TSH较正常对照组减低(P＜0.01)。21天时重度甲亢组FT3、FT4较轻度甲亢组增高(P＜0.01)，TSH较轻度甲亢组减低(P＜0.01)。60天时轻度甲亢组FT3、FT4较正常对照组呈现增高趋势，TSH较正常对照组呈现减低趋势，但无统计学意义(P＞0.05)。60天时重度甲亢组FT3、FT4较正常对照组增高(P＜0.05)，TSH较正常对照组减低(P＜0.05)。60天时重度甲亢组FT3、FT4较轻度甲亢组增高(P＜0.05)，TSH较轻度甲亢组减低(P＜0.05)。轻度甲亢组60天FT3、FT4较21天时升高，无统计学意义(P＞0.05)，TSH较21天时升高(P＜0.01)。重度甲亢组60天FT3、FT4较21天时减低，无统计学意义(P＞0.05)，TSH较21天时升高(P＜0.01)。
　　5.母鼠与子鼠21天，60天TSH具有正相关性(R值分别为0.966，P=0.00085；R=0.619，P=0.006)，均有统计学意义(P＜0.05)；母鼠与子鼠21天，60天FT3具有正相关性(R值分别为0.835，P=0.00016；R值为0.404，P=0.02)，均有统计学意义(P＜0.05)；母鼠与子鼠21天，60天FT3具有正相关性(R值分别为0.898，P=0.00043；R=0.871，P=0.00025)，均有统计学意义(P＜0.05)。
　　6.甲亢仔鼠海马组织病理学改变：正常对照组仔鼠各时期海马组织细胞排列整齐，细胞大小均匀。轻度甲亢组仔鼠海马组织细胞排列稍紊乱，细胞大小不一致。重度甲亢组仔鼠海马组织细胞排列紊乱，大量细胞变性。
　　7.仔鼠海马组织蛋白的表达：0天21天60天时轻度甲亢组突触体素较正常对照组减低，有统计学意义(P＜0.05)；0天21天60天时重度甲亢组突触体素较正常对照组减低，有统计学意义(P＜0.05)，0天21天60天时重度甲亢组突触体素较轻度甲亢组减低，有统计学意义(P＜0.05)。0天21天60天时轻度甲亢组nNOS较正常对照组增高，有统计学意义(P＜0.05)；0天21天60天时重度甲亢组nNOS较正常对照组增高，有统计学意义(P＜0.05)；0天21天60天时重度甲亢组nNOS较轻度甲亢组增高，有统计学意义(P＜0.05)。各组中nNOS和突触体素随时间增加表达增高，以21天时最高(P＜0.05)；60天时两蛋白表达均较0天有升高趋势，无统计学意义(P＞0.05)。两蛋白间具有负相关性(R=-0.433，P＜0.05)。
　　结论：
　　1.甲状腺激素可以通过胎盘进入胎鼠的血液循环，导致新生鼠甲亢。
　　2.母体甲亢程度越严重，仔鼠甲亢程度越明显。
　　3.甲亢可以引起仔鼠海马突触体素表达减少。
　　4.甲亢可以使仔鼠海马神经元型一氧化氮合酶表达增加。