原发性肾病综合征患者尿液及肾组织中NGAL的表达及意义

摘要

目的：原发肾病综合征(primary nephrotic syndrome，PNS)是临床常见肾脏疾病，可伴有感染、血栓和栓塞，急性肾损伤，高脂血症以及水、电解质失衡等多种并发症，其中急性肾损伤(acute renal injury，AKI)是其常见且危重的并发症之一。PNS患者合并AKI者，临床表现为无明显诱因出现少尿、肾功能急剧恶化，肾脏组织病理常表现为急性肾小管间质损伤如急性肾小管坏死(acute tubular necrosis，ATN)。故肾脏穿刺病理活检是诊断急性肾小管坏死的金标准，但它是一项有创的，并存在风险的诊断方法。因此探索早期、无创、特异性反映ATN的生物学标记物对AKI的防治具有重要临床意义。大量研究表明，中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinaseassociated lipocalin，NGAL)是一个能早期反映急性肾损伤的生物学标记物。本实验通过检测PNS患者尿液及肾组织中NGAL的表达，分析PNS患者不同病理类型尿液和肾组织NGAL表达水平，以及PNS合并AKI时的表达特点；尿NGAL水平与PNS患者病理类型和临床指标(如尿蛋白定量、血肌酐等)的相关性；旨在探讨NGAL在PNS合并AKI中的作用及其临床意义。
　　方法：(1)选择符合PNS诊断标准(24小时尿蛋白>3.5g，血浆白蛋白<30g/L)的患者共72例，其中男性45例，女性27例，年龄18-76岁，平均(37.47±18.61)岁。所有患者均行肾穿刺活检。根据病理报告有无急性肾小管坏死分为①肾病综合征组57例，男30例，女27例。其中包括肾小球微小病变(MCD)24例，男16例，女8例，膜性肾病(MN)23例，男15例，女8例和系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)10例，男6例，女4例。②肾病综合征合并急性肾小管坏死组(ATN)15例，男8例，女7例，其中MCD合并ATN10例，MsPGN合并ATN5例。(2)正常对照组：尿标本来自健康体检者15例，男8例，女7例。肾组织来自肾脏肿瘤或重复肾切除术患者的正常肾组织，共5例，男3例，女2例；(3)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测尿液中NGAL的水平，并进行组间比较。免疫组化法检测肾组织中NGAL的表达。(4)同时测定24小时尿蛋白定量、血白蛋白、血肌酐、尿素氮、血β2微球蛋白；上述指标分别与尿NGAL水平进行相关性分析。(5)临床指标及实验数据以X±s表示，采用单因素方差分析和非参数统计方法分析，进一步两两比较用SNK法分析。采用SPSS13.0软件处理数据，以p<0.05代表有统计学意义。
　　结果：
　　1 PNS患者尿中NGAL水平
　　PNS组患者尿NGAL水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义(p<0.05)，MCD组、MN组、MsPGN组及正常对照组尿NGAL水平分别为(46.81±15.75、22.09±7.69、15.31±3.74、8.03±0.35)ng/ml。PNS患者各病理类型之间尿NGAL水平以MCD组显著高于MN组和MsPGN组，差异有统计学意义(p<0.05)。而MN组与MsPGN组比较尿NGAL水平无显著差异(p>0.05)。
　　2 PNS患者肾组织NGAL的表达
　　NGAL表达于正常对照组肾小管上皮细胞。PNS组NGAL较正常对照组表达明显增强。MCD组、MN组、MsPGN组及正常对照组NGAL表达的EI值分别为(5.69±0.54)%、(5.47±0.66)%、(5.66±0.31)%、(3.16±0.69)%、(p<0.05)。PNS各病理类型之间比较，无统计学差别(p>0.05)。
　　3 PNS合并AKI患者尿中NGAL的水平
　　PNS合并ANT组尿NGAL的水平(84.41±20.21)ng/ml较PNS无ANT组(31.31±17.63)ng/ml明显升高(p<0.05)。其中MCD合并ATN组尿NGAL水平为(85.16±20.51)ng/ml，较MCD无ATN组(46.81±15.75)ng/ml显著升高，差异有统计学意义(p<0.05)。MsPGN合并ATN患者尿中NGAL水平(82.91±9.78ng/ml)较MsPGN无ATN组(15.31±3.74ng/ml)显著升高，差异有统计学意义(p<0.05)。
　　4 PNS合并AKI患者肾组织NGAL免疫组织化学结果
　　PNS合并ANT组肾组织NGAL的EI值(13.05±3.07)%较PNS无ANT组(5.59±0.56)%明显升高(p<0.05)。其中MCD合并ATN组肾组织NGAL的EI值为(12.24±2.46)%，较MCD无ATN组(5.69±0.54)%显著增强，差异有统计学意义(p<0.05)。MsPGN合并ATN患者肾组织NGAL的EI值为(14.68±3.80)%，较MsPGN无ATN组(5.66±0.31)%显著增强，差异有统计学意义(p<0.05)。
　　5相关分析结果：
　　尿NGAL水平与血肌酐、尿素氮、血p2MG和24小时尿蛋白定量呈正相关(r=0.299*，r=0.234*，r=0.432*，r=0.254*，**p<0.01，*p<0.05)，与血浆白蛋白呈负相关(r=-0.563，p<0.01)。
　　肾组织中NGAL的表达与尿NGAL呈正相关(r=0.483，p<0.01)。
　　结论：
　　1 PNS患者尿中和肾组织NGAL水平明显升高。
　　2 PNS患者合并AKI时尿中和肾组织NGAL表达明显升高，肾组织NGAL和尿NGAL水平呈显著正相关。尿中和肾组织NGAL水平可能反映PNS患者肾小管间质病变。
　　3检测尿NGAL可以作为PNS判断是否合并急性肾小管坏死的一个无创、敏感指标，且早于血肌酐和尿素氮。