血管内皮生长因子受体2基因多态性与子宫内膜异位症发病风险的关联研究

摘要

目的：子宫内膜异位症(endometriosis，简称内异症)是以子宫内膜组织在子宫腔被覆内膜及子宫肌层以外的部位出现、生长、浸润及反复出血为特征的常见的妇科疾病。目前，内异症在育龄期妇女中发病率达到10-15%，已经成为育龄期妇女慢性盆腔痛、痛经和不孕的主要原因，但其病因和发病机制尚不明确。研究证实新生血管的生成在异位内膜种植并形成内异症的过程中起重要作用。血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)是已知作用最强的促进血管生成的因子，而它刺激内皮细胞增生、增加血管通透性和促进血管生成的作用主要是通过结合并活化血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factorreceptor-2，VEGFR-2)来完成的。研究报道内异症患者的异位及在位子宫内膜组织中VEGFR-2的表达水平明显高于健康对照，提示VEGFR-2可能在内异症发生发展过程中起一定作用。存在于VEGFR-2基因上的单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms，SNPs)可能通过影响该基因的转录或翻译改变其蛋白的表达，继而影响内异症的发病风险。本研究旨在探讨VEGFR-2基因的遗传性多态位点与中国北方汉族妇女内异症发病风险的关联。
　　方法：收集425例内异症患者和430例健康对照妇女的静脉抗凝血各5ml。采用蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法提取两组对象外周静脉血中白细胞的DNA。根据HapMap数据库中VEGFR-2基因的中国北方汉族人群的数据，利用Haploview软件，通过htSNPs(haplotype tag singlenucleotide polymorphisms)的方法对VEGFR-2基因上的SNP位点进行筛选，最终确定了5个多态性位点：+1192C/T(rs2305948)、+1719T/A(rs1870377)、IVS6+54C/T(rs7692791)、IVS25-92C/T(rs1531289)和+31C/T(rs7667298)。采用聚合酶链反应和连接酶检测反应(polymerase chainreaction-ligase detection reaction，PCR-LDR)方法检测以上5个多态位点在病例-对照人群中的基因型频率分布情况。数据统计分析采用SPSS13.0版软件包(SPSS Company，Chicago，Illinois，USA)进行分析。P<0.05被认为差异有统计学意义。病例组和对照组的个体年龄差异采用t检验。Hardy-Weinberg平衡分析用于评估对照组观察值和预期值基因型分布情况。比较病例组和对照组各位点基因型和等位基因型频率采用卡方检验。以非条件Logistic回归法计算表示相对风险度的比值比(odds ratio，OR)及95%可信区间(confidence interval，CI)。
　　结果：
　　1.健康对照组中VEGFR-2+1192C/T，+1719T/A，+31C/T，IVS6+54C/T，IVS25-92A/G五个多态位点基因型分布频率均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。
　　2.VEGFR-2基因+1192C/T多态C、T等位基因频率在内异症组和对照组分别为89.5%、10.5%和86.5%、13.5%，两组相比无统计学意义(P>0.05)；C/C、C/T、T/T基因型频率分布在患者组(80.5%，18.1%和1.4%)和对照组(76.0%，20.9%和3.0%)间也无差异(P>0.05)；与C/C基因型相比，携带C/T和T/T基因型不增加内异症的发病风险，OR值分别为0.82(95%CI=0.58～1.15)和0.44(95%CI=0.17～1.18)。
　　3.VEGFR-2基因+1719T/A多态T、A等位基因频率在内异症组和对照组分别为55.2%、44.8%和53.8%、46.2%，两组相比无统计学意义(P>0.05)；T/T、T/A、A/A基因型频率分布在患者组(31.5%，47.2%和21.2%)和对照组(28.1%，51.4%和20.5%)间也无差异(P>0.05)；与T/T基因型相比，T/A和A/A基因型不增加内异症的发病风险，OR值分别为0.82(95%CI=0.60～1.12)和0.92(95%CI=0.63～1.36)。
　　4.VEGFR-2基因+31C/T多态C、T等位基因频率在内异症组和对照组分别为66.5%、33.5%和65.6%、34.4%，两组相比无统计学意义(P>0.05)；C/C、C/T、T/T基因型频率分布在患者组(42.4%，48.2%和9.4%)和对照组(42.6%，46.0%和11.4%)间也无差异(P>0.05)；与C/C基因型相比，C/T和T/T基因型不增加内异症的发病风险，OR值分别为1.05(95%CI=0.79～1.40)和0.83(95%CI=0.52～1.32)。
　　5.VEGFR-2基因IVS6+54C/T多态T、C等位基因频率在内异症组和对照组分别为59.9%、40.1%和59.4%、40.6%，两组相比无统计学意义(P>0.05)；T/T、T/C、C/C基因型频率分布在患者组(37.2%，45.4%和17.4%)和对照组(34.2%，50.5%和15.3%)间也无差异(P>0.05)；与T/T基因型相比，T/C和C/C基因型不增加内异症的发病风险，OR值分别为0.83(95%CI=0.62～1.11)和1.04(95%CI=0.70～1.56)。
　　6.VEGFR-2基因IVS25-92G/A多态G、A等位基因频率在内异症组和对照组分别为82.1%、17.9%和81.2%、19.8%，两组相比无统计学意义(P>0.05)；G/G、G/A、A/A基因型频率分布在患者组(67.3%，29.6%和3.1%)和对照组(64.0%，32.6%和3.5%)间也无差异(P>0.05)；与G/G基因型相比，G/A和A/A基因型不增加内异症的发病风险，OR值分别为0.87(95%CI=0.65～1.16)和0.83(95%CI=0.39～1.78)。
　　结论：
　　本研究结果提示VEGFR-2基因上通过htSNPs的方法筛选出的五个多态性位点+1719T/A，+1192C/T，+31C/T，IVS25-92A/G和IVS6+54C/T可能与子宫内膜异位症的发病风险无关。