线粒体丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在食管癌组织中的表达及临床意义

摘要

目的:肿瘤的形成和发展与细胞分化异常及凋亡失调密切相关。线粒体丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2是凋亡抑制蛋白(IAPS)家族的负调节因子,可解除凋亡抑制蛋白IAPS对凋亡的抑制作用,从而在调节细胞凋亡中发挥重要作用。食管癌是我国最为高发的恶性肿瘤之一。根据2008年全国流行病学调查食管癌全国发病位列各类恶性肿瘤第5位;死亡21.1万例,居各类恶性肿瘤的第4位。一直以来,关于食管癌的发病机制进行了大量的研究,目前认为食管癌的发生发展是由多基因参与的过程,多种因素在食管癌的发生发展中扮演重要角色,但具体机制仍未详细阐明。通过研究细胞凋亡揭示肿瘤细胞发展演化机制具有一定意义。食管癌的预后是目前人们研究的重点。我们通过检测线粒体促凋亡分子丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在食管癌组织、癌旁组织与食管良性病变粘膜组织的表达情况,探讨Omi/HtrA2与临床病理类型、临床分期、预后的关系及临床意义。
　　 方法:采用免疫组织化学En Vinsion system法对40例食管癌组织、40例癌旁组织及13例食管良性病变(反流性食管炎8例、食管溃疡4例、食管结核1例)粘膜组织中Omi/HtrA2的表达情况进行检测。标本取自河北医科大学第四医院胸外科2005年1月～2006年1月病历资料完整、随访结果完整、通过手术治疗且术前未做任何化疗、放疗的40例食管鳞状细胞癌患者的癌组织和癌旁组织蜡块和13例食管良性病变粘膜组织蜡块。所有标本均制成5微米连续切片、烘干、脱蜡、水化、抗原修复、孵育、显色、摄片等步骤。Omi/HtrA2阳性表达以细胞浆中出现黄色或棕黄色颗粒作为标准。依据阳性染色强度和阳性细胞表达数分别进行结果判断。①依据阳性染色强度判断:细胞未见染色,阴性,记0分;细胞呈浅黄色,记1分;细胞胞浆呈黄色,记2分;细胞浆中呈棕黄色,记3分。②依据阳性表达数记分:在400倍光镜下观察lO个不同视野,无阳性表达,记0分;阳性表达面积≤25％,记1分;25%-50%记2分;≥50%,为强阳性,记3分。上述两种判断记分结果乘积为最终计分结果。最终计分结果:＜3分为阴性,≥3分阳性;3-4分为阳性(+),6-9分为强阳性(++)。采用统计学SPSS13.0软件进行统计学分析,应用X2检验和Fisher精确概率法检验;生存率采用Kaplan-Meier法及Log-rank检验。
　　 结果:
　　 1研究显示,Omi/HtrA2阳性产物定位于胞浆,阳性表达物呈现黄色或棕黄色。Omi/HtrA2在食管癌组织中表达的阳性率70.00%,在癌旁的表达率为27.50%,在食管良性病变粘膜组织中的表达率为23.08%。Omi/HtrA2在食管癌组织中的表达明显高于癌旁组织与食管良性病变粘膜组织。进一步分析,食管癌组织与癌旁组织之间统计学比较具有显著差异(P＜0.01),癌组织与良性病变粘膜之间统计学比较结果有显著差异(P＜0.01),说明癌组织中Omi/HtrA2的表达明显高于癌旁组织、良性病变粘膜组织。良性病变粘膜组织与癌旁组织之间没有统计学差异(P＞0.05);2 Omi/HtrA2在食管癌组织中的表达与肿瘤组织分化程度相关(P＜0.05),Omi/HtrA2在中高分化食管癌中表达阳性率为83.33%,在低分化食管癌中表达阳性率50.00%,差异有统计学意义(P＜0.05);
　　 3 Omi/HtrA2在食管癌组织中的表达与年龄、性别、部位无关(P＞0.05):与浸润深度、淋巴结转移、临床分期相关(P＜0.05)。临床分期早者(T1+T2)的Omi/HtrA2的阳性表达率为80.00%,临床分期晚者(T3+T4)阳性表达率为60.00%,差异有统计学意义;无淋巴结转移组中的Omi/HtrA2的阳性率为88.23%,有淋巴结转移组的阳性表达率为56.52%,差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 4 Omi/HtrA2阳性表达组的5年生存率为47.8%,阴性表达组的5年生存率为15%,全组5年生存率为44%。通过Kaplan-Meier单因素分析及Log-Rank检验单因素分析发现各组之间生存差别有统计学意义(P=0.029,P＜0.05)。
　　 结论:
　　 1 Omi/HtrA2在食管癌中高表达提示可能促进食管癌细胞的凋亡,在食管癌的进展过程中扮演重要角色;
　　 2 Omi/HtrA2的表达与食管癌组织病理学分化程度相关,细胞分化程度越高,Omi/HtrA2表达阳性率越高,且与临床分期、有无淋巴结转移、浸润深度也有明显相关性。
　　 3 Omi/HtrA2阳性表达组5年生存率明显高于Omi/HtrA2阴性表达组。推测可能是由于Omi/HtrA高表达促进了肿瘤组织的凋亡,从而对患者的长期生存起一定作用,降低了肿瘤的复发及转移的可能性。