点阵Er:YAG激光(2940nm)对兔耳增生性瘢痕不同时期胶原重塑的影响

摘要

目的：点阵激光已成功应用于浅表性瘢痕的治疗，但对增生性瘢痕的治疗鲜有报导。本实验采用点阵Er：YAG激光(2940nm)照射兔耳增生性瘢痕，通过观察各实验组瘢痕组织的胶原纤维分布特征以及Ⅰ、Ⅲ型胶原构成比例的变化情况，探讨其对增生性瘢痕的治疗效果以及不同时期治疗效果的区别，从而为临床点阵激光治疗增生性瘢痕提供理论依据。
　　方法：同种属新西兰大白兔6只，雄性，体重2.0±0.18kg，在每只兔耳腹侧面中段，使用圆形环钻沿长轴避开血管，各做4个直径为6mm的圆形全层皮肤缺损创面，各创面间隔1.0cm，深达软骨表面，并刮去软骨膜，共形成48个圆形创面。将兔耳增生性瘢痕块随机分为六组，行激光治疗和对照：
　　①增生期治疗组(n=8)：造模后30天(增生期)行点阵铒激光照射治疗。激光治疗参数：能量密度162 J/cm2，重复扫描5次。激光治疗术后22天取材。
　　②增生期对照组(n=8)：作为①组空白对照不做治疗，与①组同时取材。
　　③消退期治疗组(n=8)：造模后60天(消退期)行点阵铒激光照射治疗。治疗参数、取材时间同①组。
　　④消退期对照组(n=8)：作为③组空白对照不做治疗，与③组同时取材。
　　⑤成熟期治疗组(n=8)：造模后90天(成熟期)行点阵铒激光照射治疗。治疗参数、取材时间同①组。
　　⑥成熟期对照组(n=8)：作为⑤组空白对照不做治疗，与⑤组同时取材。
　　对标本脱水浸蜡石蜡包埋，进行组织切片，厚度为5μm。采用HE、Masson和天狼猩红染色观察各实验组兔耳增生性瘢痕组织中胶原纤维分布特征；采用苦味酸--天狼猩红偏振光法及图像分析技术测定各实验组兔耳增生性瘢痕组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的构成比例。二者用于反映点阵激光治疗增生性瘢痕的效果。
　　统计各实验组兔耳增生性瘢痕组织中Ⅲ型胶原所占比例，数据用均数±标准差表示。应用SAS8.0进行完全随机分组两因素析因设计与方差分析，以p<0.05作为判断差异显著性的标准。
　　结果：
　　1组织形态学变化
　　增生期：
　　对照组：瘢痕组织突出于皮肤表面，色红，质硬，范围在原术野内，光镜下见微血管增生，胶原纤维大量增生，外形粗大，排列紊乱，有旋涡状结构。
　　治疗组：瘢痕组织较对照组颜色变浅、质地稍软，光镜下见瘢痕组织胶原纤维较对照组颜色变浅，纤维变细，胶原排列有序。
　　消退期：
　　对照组：瘢痕有所萎缩，但仍高于皮肤表面，颜色变淡，质较硬，光镜下见微血管减少，胶原纤维粗大，较增生期密集，排列进一步紊乱，胶原结节少见。
　　治疗组：瘢痕组织较对照组颜色变淡、质软且弹性增加，光镜下见瘢痕组织胶原纤维较对照组颜色变浅，纤维变细，胶原排列较疏散、规则。
　　成熟期：
　　对照组：瘢痕明显萎缩，较平坦，中心部分颜色变白，质较周围正常皮肤硬。光镜下见微血管少，胶原纤维较消退期变细，排列更紊乱、密集，无胶原结节。
　　治疗组：瘢痕组织的颜色、质地较对照组有所改善，接近与周围正常皮肤。光镜下见胶原纤维排列疏散并趋于一致。
　　2偏光显微镜观察与图象分析
　　增生期对照组瘢痕组织中，黄色粗大的Ⅰ型胶原纤维呈丛束状分布，排列紊乱，密度不均，大约占整个视野的56％，纤细绿色的Ⅲ型胶原纤维呈网疏状分布于Ⅰ型胶原周围，约占44％；治疗组胶原纤维排列较对照组有序，Ⅲ型胶原所占比例增加，约占47％。消退期对照组瘢痕组织中，大量粗大的Ⅰ型胶原纤维，聚集成块状，排列进一步紊乱，约占整个视野的82％，Ⅲ型胶原所占比例低于18％；治疗组胶原纤维排列较对照组疏散、规则，Ⅲ型胶原纤维所占比例较对照组明显增加，约占30％。成熟期对照组瘢痕组织中Ⅰ型胶原纤维呈竹节状，排列更加紊乱，约占93％以上，Ⅲ型胶原所占比例低于7％；治疗组胶原纤维排列较对照组疏散并趋于一致，Ⅲ型胶原纤维所占比例较对照组显著增加，约占24％。
　　3统计学分析
　　对各组标本Ⅲ型胶原所占比例进行两因素多水平的析因分析，结果表明：增生性瘢痕不同时期，Ⅲ型胶原所占比例不同(F=135.933，P=0.000＜0.01)；点阵铒激光治疗可以增加瘢痕组织中Ⅲ型胶原所占比例(F=52.476，P=0.000＜0.01)；增加程度与瘢痕接受治疗时期有关(F=6.355，P=0.004＜0.01)，增生期较对照组增加(3％)＜消退期(12％)＜成熟期(17％)。根据统计学结果认为：点阵Er：YAG激光(2940nm)对兔耳增生性瘢痕治疗效果的明显程度依次为增生期＜消退期＜成熟期。
　　结论：
　　1点阵Er：YAG激光(2940nm)治疗后，瘢痕组织中胶原纤维的形态向正常皮肤胶原纤维的形态转变，Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的比例重新接近于正常皮肤中的比例。瘢痕组织变软且弹性增加，质地得到明显改善。
　　2点阵Er：YAG激光(2940nm)对不同时期增生性瘢痕治疗效果不同。点阵激光对增生期瘢痕虽有治疗效果，但不明显：对消退期瘢痕的治疗效果较增生期明显提高；成熟期是三者之中治疗效果最好的时期。